Cell Direct RT qPCR -sarja – SYBR GREEN I -suora solulyysi, soluvalmiit yksivaiheiset qRT-PCR-sarjat
Kuvaukset
Tämä pakkaus käyttää ainutlaatuista lyysipuskurijärjestelmää, joka voi nopeasti vapauttaa RNA:ta viljellyistä solunäytteistä RT-qPCR-reaktioita varten, mikä eliminoi aikaa vievän ja työlän RNA:n puhdistusprosessin.RNA-templaatti voidaan saada vain 7 minuutissa.5×Direct RT Mix ja 2×Sarjan mukana toimitetut suorat qPCR Mix-SYBR -reagenssit voivat saada nopeasti ja tehokkaasti reaaliaikaisia kvantitatiivisia PCR-tuloksia.
5×Direct RT Mix ja 2×Direct qPCR Mix-SYBR:llä on vahva inhibiittoritoleranssi, ja näytteiden lysaattia voidaan käyttää mallina suoraan RT-qPCR:lle.Tämä pakkaus sisältää ainutlaatuisen RNA:n korkeaaffiniteetin Foregene-käänteistranskriptaasin ja Hot D-Taq DNA -polymeraasin, dNTP:t, MgCl:n2, reaktiopuskuri, PCR-optimoija ja stabilointiaine.
Tekniset tiedot
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Sarjan komponentit
| Osa I | Puskuri CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| Puskuri ST | |
| Osa II | DNA Eraser |
| 5× Direct RT Mix | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | |
| 50× ROX-referenssiväri | |
| RNaasi-vapaa ddH2O | |
| Ohjeet | |
Ominaisuudet ja edut
■Yksinkertainen ja tehokas: Cell Direct RT -tekniikalla RNA-näytteet voidaan saada vain 7 minuutissa.
■ Näytteen tarve on pieni, jopa 10 solua voidaan testata.
■ Suuri suorituskyky: se pystyy nopeasti havaitsemaan RNA:n soluista, joita on viljelty 384-, 96-, 24-, 12- ja 6-kuoppalevyillä.
■ DNA Eraser voi nopeasti poistaa vapautuneet genomit, mikä vähentää huomattavasti vaikutusta myöhempien kokeiden tuloksiin.
■ Optimoitu RT- ja qPCR-järjestelmä tekee kaksivaiheisesta RT-PCR-käänteistranskriptiosta tehokkaampaa ja PCR:stä spesifisemmän ja vastustuskykyisemmän RT-qPCR-reaktion estäjille.
Kit-sovellus
Soveltamisala: viljellyt solut.
- Näytteen lyysillä vapautunut RNA: koskee vain tämän pakkauksen RT-qPCR-templaattia.
- Sarjaa voidaan käyttää seuraaviin tarkoituksiin: geenien ilmentymisanalyysi, siRNA-välitteisen geenin hiljennysvaikutuksen todentaminen, lääkeseulonta jne.
Kaavio
Varastointi ja säilyvyys
Tämän sarjan osa I tulee säilyttää 4 ℃:ssa;Osa II tulee säilyttää -20 ℃:ssa.
Foregene Protease Plus II tulee säilyttää 4 °C:ssa℃, älä jäädytä -20 ℃.
Reagenssi 2×Direct qPCR Mix-SYBR tulee säilyttää -20:ssa℃pimeässä;jos sitä käytetään usein, se voidaan säilyttää myös 4℃ lyhytaikaiseen varastointiin (käytä 10 päivän kuluessa).
Reaaliaikainen PCR-alukkeen suunnitteluperiaatteet
Forward Primer ja Reverse Primer
Reaaliaikaisessa PCR:ssä alukkeen suunnittelu on erittäin tärkeää.Alukkeet liittyvät PCR-monistuksen spesifisyyteen ja tehokkuuteen, ja ne voidaan suunnitella seuraavien periaatteiden mukaisesti:
Alukkeen pituus: 18-30 bp.
GC-pitoisuus: 40-60 %.
Tm-arvo: Primer-suunnitteluohjelmisto, kuten Primer 5, voi antaa pohjamaalin Tm-arvon.Ylävirran ja alavirran alukkeiden Tm-arvojen tulisi olla mahdollisimman lähellä.Myös Tm-laskentakaavaa voidaan käyttää: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR:ää suoritettaessa pariutumislämpötilaksi valitaan yleensä lämpötila, joka on alle alukkeen Tm-arvon 5 °C (vastaava pariutumislämpötilan nousu voi lisätä PCR-reaktion spesifisyyttä).
Alukkeet ja PCR-tuotteet:
Suunnittelualukkeen PCR-amplifikaatiotuotteen pituus on edullisesti 100-150 bp.
Suunnittelupohjamaaleja mallin toissijaisessa rakennealueella tulee välttää mahdollisimman paljon.
Vältä kahden tai useamman komplementaarisen emäksen muodostumista ylävirran ja alavirran alukkeiden 3'-päiden väliin.
Primer 3′ -liitinpohjaa ei voi olla läsnä 3 ylimääräisellä peräkkäisellä G:llä tai C:llä.
Itse alukkeilla ei voi olla komplementaarisia rakenteita, muuten muodostuu hiusneularakenne, joka vaikuttaa PCR-monistukseen.
ATCG tulee jakaa mahdollisimman tasaisesti alukesekvenssissä, ja 3'-terminaalista emästä tulee välttää T:nä.
Liite 1: Cell Direct RT-qPCR Kit -komponentin lisäpaketti
1.Soluhajotusliuos
|
| |||
| Sarjan komponentit (24-kuoppainen lyysijärjestelmä / kuoppa) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Osaminä | Puskuri CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Puskuri ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| OsaII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
2.RT Sekoitus
|
| |
| Sarjan komponentit (20 μl:n reaktiojärjestelmä) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNaasi-vapaa ddH2O | 1,7 ml × 2 |
|
| ||
| Sarjan komponentit (20 μl:n reaktiojärjestelmä) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-SYBR | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 50× ROX-referenssiväri | 40 μl | 200 μl |
| RNaasi-vapaa ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Käyttöohjeet:
