Plant Total RNA Isolation Kit Total RNA Purificaiton Kit kasveille, joissa on vähän polysakkarideja ja polyfenoleja
Tekniset tiedot
50 valmistelua, 200 valmistelua
Pakkaus käyttää Foregenen kehittämää spin-kolonnia ja kaavaa, jolla voidaan tehokkaasti erottaa erittäin puhdasta ja laadukasta kokonais-RNA:ta erilaisista kasvikudoksista, joilla on alhainen polysakkaridi- ja polyfenolipitoisuus.Kasvinäytteille, joissa on korkea polysakkaridi- tai polyfenolipitoisuus, on suositeltavaa käyttää Plant Total RNA Isolation Plus Kit -sarjaa parempien RNA-uuttotulosten saamiseksi.Sarja sisältää DNA-puhdistuspylvään, joka voi helposti poistaa genomisen DNA:n supernatantista ja kudoslysaatista.Vain RNA:ta sisältävä pylväs voi sitoa RNA:ta tehokkaasti.Sarja pystyy käsittelemään suuren määrän näytteitä samanaikaisesti.
Koko järjestelmä ei sisällä RNaasia, joten puhdistettu RNA ei hajoa.Puskuri PRW1 ja puskuri PRW2 voivat varmistaa, että saatu RNA ei ole proteiinin, DNA:n, ionien tai orgaanisten yhdisteiden saastuttama.
Sarjan komponentit
| Puskuri PSL1, puskuri PS, puskuri PSL2 |
| Puskuri PRW1, puskuri PRW2 |
| RNaasi-vapaa ddH2O, DNA-puhdistuskolonni |
| RNA-vain sarake |
| Ohjeet |
Ominaisuudet ja edut
■ Toiminta huoneenlämmössä (15-25 ℃) koko prosessin ajan ilman jäähaudetta ja matalan lämpötilan sentrifugointia.
■ Täydellinen RNaasi-vapaa sarja, ei tarvitse huolehtia RNA:n hajoamisesta.
■ DNA-Cleaning Column sitoutuu spesifisesti DNA:han, joten pakkaus voi poistaa genomisen DNA:n kontaminaation lisäämättä DNaasia.
■ Korkea RNA:n saanto: Vain RNA:ta sisältävä pylväs ja ainutlaatuinen kaava voivat puhdistaa RNA:ta tehokkaasti.
■ Nopea nopeus: helppo käyttää ja voidaan suorittaa 30 minuutissa.
■ Turvallisuus: orgaanista reagenssia ei tarvita.
■ Korkea laatu: Puhdistetut RNA-fragmentit ovat erittäin puhtaita, vapaita proteiineista ja muista epäpuhtauksista, ja ne soveltuvat erilaisiin loppupään kokeisiin.
Kit-sovellus
Se soveltuu kokonais-RNA:n uuttamiseen ja puhdistamiseen tuoreista tai pakastetuista kasvikudosnäytteistä (erityisesti tuoreesta kasvin lehtikudoksesta), joissa polysakkaridi- ja polyfenolipitoisuus on alhainen.
Työnkulku
Kaavio
Plant Total RNA Isolation Kit Plus käsitteli 50 mg tuoreita polysakkaridien ja polyfenolien lehtiä, ja 5 % puhdistettua RNA:ta testattiin elektroforeesilla.
1: Banaani
2: Ginkgo
3: puuvillaa
4: granaattiomena
Varastointi ja säilyvyys
Sarjaa voidaan säilyttää 12 kuukautta huoneenlämmössä (15–25 ℃) kuivassa ympäristössä ja 2–8 ℃ pidempään (24 kuukautta).
PSL1-puskuria voidaan säilyttää 4 ℃:ssa 1 kuukauden ajan 2-hydroksi-1-etaanitiolin (valinnainen) lisäämisen jälkeen.
Ongelma-analyysiopas
Seuraava analyysi ongelmista, joissa saatat kohdataKasvi yhteensäRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
Pyörivä kolonni on tukossa
Spin-pylvään tukkeutuminen aiheuttaa RNA:n saannon pienenemisen tai sitä ei edes voida puhdistaa RNA:n saamiseksi, ja saadun RNA:n laatu on heikko.
Yleisten syiden analyysi:
1. Näyte ei ole täysin rikki.
Näytteen epätäydellinen fragmentoituminen voi tukkia DNA-puhdistuspylvään, mikä voi myös vaikuttaa RNA:n saantoon ja laatuun.Suosittelemme, että näytteiden fragmentointia suoritettaessa jauhetaan nopeasti sisään riittävä määrä nestetyppeä, jotta näytteiden kudokset, kuten soluseinät ja solukalvot, rikkoutuvat mahdollisimman paljon.Polyfenolipolysakkaridien kasvinäytteisiin suosittelemme Plant Total RNA Isolation Kit Plus -pakkauksen käyttöä.
2.Ime DNA-puhdistuspylväästä eristetty supernatantti, ime mahdollinen solujätepelletti.
Aspiroitu solujätepelletti voi tukkia vain RNA:ta sisältävän kolonnin RNA-adsorptiomenettelyjen aikana (katso menettelyn vaihe 5, polysakkaridipolyfenolimenettelyn vaihe 6).Suosittelemme, että tätä supernatanttia aspiroitaessa on noudatettava varovaisuutta, jotta vältetään solujätteen aspiraatio.
3. Alkuperäinen näytemäärä on liian suuri.
Liiallinen näytteen käyttö johtaa näytteen epätäydelliseen fragmentoitumiseen tai solujen epätäydelliseen hajoamiseen puskurilla PRL1 tai puskurilla PSL1, mikä johtaa tukkeutuneeseen puhdistuspylvääseen puhdistustoimenpiteitä varten.Plant Total RNA Isolation Kit -sarjan alustava enimmäismäärä on 50 mg yksittäistä puhdistettua näytettä kohden.Polyfenolipolysakkaridien kasvinäytteitä varten suosittelemme, että kokeilet Plant Total RNA Isolation Kit Plus -pakkausta.
4. Sentrifugin lämpötila on liian alhainen.
Koko RNA:n eristäminen ja puhdistus lukuun ottamatta näytekudoksen hajottamista nestemäisellä typellä, kaikki vaiheet suoritetaan huoneenlämpötilassa (20-25 °C).Joidenkin matalalämpöisten sentrifugien lämpötilat ovat alle 20 °C, mikä voi aiheuttaa tukoksia DNA-puhdistuskolonnissa ja/tai vain RNA:ta sisältävässä kolonnissa.Jos näin tapahtuu, aseta sentrifugin lämpötila 20–25 °C:seen ja esilämmitä lyysiseos ja/tai etanolierotussupernatantti 37 °C:seen.
RNA:ta ei uuteta tai RNA:n saanto on alhainen
Talteenottotehokkuuteen vaikuttavat yleensä monet tekijät, kuten: näytteen RNA-pitoisuus, toimintatapa, eluointitilavuus jne.
Analyysi yleisistä syistä alla:
1. Toimenpiteen aikana suoritettiin jäähaude tai matalan lämpötilan (4 °C) sentrifugointi.
Suositus: Käytä huoneenlämmössä (15-25°C) koko prosessin ajan, älä tee jäähaudetta ja matalan lämpötilan sentrifugointia.
2.RNA on hajonnut näytteen väärän säilytyksen tai näytteen pitkäaikaisen säilytyksen vuoksi.
Suositus: Juuri kerätyt näytteet tulee jäädyttää nopeasti nestetypessä ja säilyttää sitten -80°C:ssa pitkään, välttää näytteiden toistuvaa jäätymistä ja sulattamista;tai liota näytteet välittömästi RNA-stabilisaattori RNAlater-liuoksessa (eläinnäytteet).
3.Riittämätön näytteen fragmentoituminen ja hajoaminen johtavat puhdistuskolonnin tukkeutumiseen.
Ehdotus: Kun kudosta hiotaan, varmista, että kudos on jauhettu riittävästi, ja siirrä se nopeasti esivalmistettuun puskuriin PSL1 (varmista, että β-ME:tä on lisätty oikea määrä, katso toimenpiteen vaihe 1).
4. Eluentti lisättiin väärin.
Ehdotus: Varmista, että RNase-Free ddH2O:ta tiputetaan puhdistuskolonnin kalvon keskelle.
5. Oikeaa määrää absoluuttista etanolia ei lisätty puskuriin PSL2 tai puskuri PRW2.
Suositus: Noudata ohjeita, lisää oikea määrä absoluuttista etanolia puskuriin PSL2 ja puskuri PRW2 ja sekoita hyvin ennen sarjan käyttöä.
6. Kudosnäytteen määrä on sopimaton.
Suositus: Käytä 50 mg kudosta per 500 μl puskuria PSL1.Liian suuren kudoksen käyttö vähentää uutetun RNA:n määrää ja myös tuloksena olevan RNA:n puhtaus heikkenee.Suosittelemme voimakkaasti, että alkuperäinen näyteannos ei saisi ylittää 50 mg RNA:n uuttooperaatiota kohden.
7. Sopimaton eluutiotilavuus tai epätäydellinen eluointi.
Suositus: Puhdistuskolonnin eluenttitilavuus on 50-200 μl;jos eluutioteho ei ole tyydyttävä, on suositeltavaa pidentää aikaa huoneenlämmössä esilämmitetyn RNase-Free ddH:n lisäämisen jälkeen2O, kuten 5-10 min.
8. Puhdistuskolonnissa on etanolijäännöstä puskurilla PRW2 pesun jälkeen.
Suositus: Jos tyhjää putkea sentrifugoidaan 1 minuutin ajan ja etanolia on vielä jäljellä puskurissa PRW2 pesun jälkeen, voit pidentää tyhjän putken sentrifugointiaikaa 2 minuuttiin tai asettaa puhdistuskolonni huoneenlämpötilaan 5 minuutiksi etanolin jäännösten poistamiseksi kokonaan.
9. Sarjaa on käytetty väärin.
Ehdotus: Polyfenolipolysakkaridien kasvinäytteille ei ehkä voida saada ihanteellisia RNA-näytteitä käyttämällä yleisiä sarjoja, kuten Plant Total RNA Isolation Kit.Suosittelemme käyttämään Plant Total RNA IsolationKit Plus -pakkausta, joka on erityisesti suunniteltu polyfenolipolysakkaridien kasvinäytteisiin.Sarja, joka on erityisesti kehitetty RNA:n uuttamiseen polyfenoli- ja polysakkaridikasvinäytteistä.
OD260/OD280-arvo on alhainen
RNA-eluointi ddH:lla2O ja käytetty spektrofotometrin lukemiin johtaa alhaisiin OD260/OD280-arvoihin.Suosittelemme käyttämään 10 mM Tris-HCl:a, pH 7,5 (RNaasittoman ddH:n sijaan2O RNA:n eluoimiseksi) saadaksesi suhteellisen oikeat OD260/OD280-arvot, katso "RNA-konsentraatio- ja puhdistusmääritykset" sivulla 19.
Puhdistettu RNA hajoaa
Puhdistetun RNA:n laatu liittyy sellaisiin tekijöihin kuin näytteen säilyminen, RNaasikontaminaatio ja manipulointi.
Yleisten syiden analyysi:
1. Kudosnäytteitä ei säilytetty ajoissa keräämisen jälkeen.
Suositus: Jos kudosnäytteitä ei käytetä ajoissa keräyksen jälkeen, säilytä ne välittömästi nestetypessä alhaisessa lämpötilassa tai siirrä ne -80°C:seen pitkäaikaista säilytystä varten pikajäädytyksen jälkeen nestetypessä tai upota näytteet välittömästi RNA-stabilisaattori RNAlater-liuokseen (eläinnäytteet ).Yritä käyttää RNA:n uuttamiseen juuri kerättyjä kudosnäytteitä.
2. Kudosnäytteiden toistuva jäädytys ja sulatus.
Suositus: Kudosnäytteitä säilytettäessä on parasta leikata ne pieniksi paloiksi säilytystä varten ja ottaa niistä osa pois käytettäessä, jotta vältetään näytteiden toistuvan pakastamisen ja sulatuksen aiheuttama RNA:n hajoaminen.
3.RNase tuodaan leikkaussaliin tai kertakäyttökäsineitä, naamioita jne. ei ole käytetty.
Ehdotus: RNA-uuttokokeet on parasta tehdä erillisinä RNA-operaatioina, ja laboratoriopöytä tulee puhdistaa ennen koetta ja käyttää kertakäyttökäsineitä ja -naamioita kokeen aikana, jotta vältetään RNAasin aiheuttama RNA:n hajoaminen suurimmassa määrin.
4. Reagenssi on kontaminoitunut RNaasilla käytön aikana.
Ehdotus: Korvaa uudella sarjalla kasvien kokonais-RNA:n uuttopakkauksia vastaavia kokeita varten.
5. RNA:n käsittelyyn käytetyt sentrifugiputket ja pipetin kärjet ovat kontaminoituneet RNaasilla.
Ehdotus: Varmista, että RNA:n erottamisessa käytetyt sentrifugiputket, pipetinkärjet, pipetit jne. ovat kaikki RNaasivapaita.
Käyttöohjeet:
