Eläinten kokonais-RNA:n eristyspakkaus RNA:n kokonaisuutto- ja puhdistussarjat eläinkudoksille ja -soluille
Sarjan kuvaus:
Poimi nopeasti ja tehokkaasti erittäin puhdasta ja laadukasta kokonais-RNA:ta erilaisista eläinkudoksista.
Ei tarvitse huolehtia RNA:n hajoamisesta.Koko järjestelmä on RNaasi-vapaa
Poista DNA tehokkaasti käyttämällä DNA-puhdistuskolonnia
Poista DNA lisäämättä DNaasia
Yksinkertainen – kaikki toiminnot suoritetaan huoneenlämmössä
Nopea – toiminta voidaan suorittaa 30 minuutissa
Turvallinen – ei käytetä orgaanista reagenssia
Erittäin puhdas – OD260/280≈1,8-2,1
Sarjojen kuvaukset
50 valmistelua, 200 valmistelua
Tämä sarja käyttääspin kolonni ja kaavayrityksemme kehittämä, joka voi erottaa erittäin puhdasta ja korkealaatuista kokonais-RNA:ta erilaisista eläinkudoksista suurella tehokkuudella. Se tarjoaa tehokkaan DNA-puhdistuskolonnin, joka voi helposti erottaa ja adsorboida genomisen DNA:n supernatantista ja kudoslysaatista, yksinkertainen ja aikaa säästävä;Vain RNA-kolonni voi sitoa RNA:ta tehokkaasti ja sitä voidaan käsitellä samanaikaisesti ainutlaatuisella kaavalla. Paljon näytteitä.
Koko järjestelmä on RNaasi-vapaa, joten uutettu RNA ei hajoa;Puskuri RW1, puskuri RW2 puskuripesujärjestelmä, jotta saatu RNA on vapaa proteiinista, DNA:sta, ionista ja orgaanisista yhdisteistä.
Sarjan komponentit
| Animal Total RNA Isolation Kit | ||
| Sarjan komponentit | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Puskuri RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Puskuri RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Puskuri RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Puskuri RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNaasi-vapaa ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| Vain RNA:ta sisältävä sarake | 50 | 200 |
| DNA-puhdistuskolonni | 50 | 200 |
| Käyttöopas | 1 kpl | 1 kpl |
Tuotetiedot
| Muoto | Pyörivä kolonni | Puhdistuskomponentti | Foregene-kolonni, reagenssi |
| Flux | 1-24 näytettä | Aika per valmistelu | ~30 min (24 näytettä) |
| Sentrifugoi | Pöydän sentrifugi | Pyrolyysierotus | Keskipakoerotus |
| Näyte | Eläinten kudos;solu | Näytteiden määrä | Kudos: 10-20 mg;Solu: (1-5) × 106 |
| Eluointitilavuus | 50-200 μl | Suurin lataustilavuus | 850 μl |
Ominaisuudet ja edut
■ Ei tarvitse huolehtia RNA:n hajoamisesta;koko järjestelmä on RNaasi-vapaa
■ Poista tehokkaasti DNA:ta käyttämällä DNA-puhdistuskolonnia
■ Poista DNA lisäämättä DNaasia
■ Yksinkertaiset toiminnot suoritetaan huoneenlämmössä
■ Nopea käyttö voidaan suorittaa 30 minuutissa
■ Turvallinen – orgaanista reagenssia ei tarvita
■ Erittäin puhdas -OD260/280≈1,8-2,1
Kit-sovellus
Se soveltuu kokonais-RNA:n uuttamiseen ja puhdistamiseen useista tuoreista tai jäädytetyistä eläinkudoksista tai viljellyistä soluista.
Tuotteen parametrit
■ Alavirran sovellukset: ensimmäisen juosteen cDNA-synteesi, RT-PCR, molekyylikloonaus, Northern blot jne.
■ Näytteet: eläinkudokset, viljellyt solut
■ Annostus: Kudokset 10-20 mg, solut (2-5) × 106
■ Puhdistuskolonnin suurin DNA:n sitoutumiskapasiteetti: 80 μg
■ Eluointitilavuus: 50-200 μl
Kaavio
Animal Total RNA Isolation Kit käsitelty 20 mg
Tuoreet hiiren näytteet, ota 5 % puhdistettua kokonais-RNA:ta 1 % agaria
Glykogeelielektroforeesi
1: Perna 2: Munuainen
3: Maksa 4: Sydän
Varastointi ja säilyvyys
Sarjaa voidaan säilyttää 24 kuukautta huoneenlämmössä (15–25 ℃) tai 2–8 ℃ pidempään.Puskuria RL1 voidaan säilyttää 4 ℃:ssa 1 kuukauden β-merkaptoetanolin (valinnainen) lisäämisen jälkeen.
Lainatut artikkelit
1.JOS:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et ai.mRNA:lla ladatut lipidin kaltaiset nanohiukkaset maksapohjan muokkaukseen Central Composite Designin optimoinnin kautta.Adv.Toiminto.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.JOS:18.187:He X, Hong W, Yang J, et ai.Solujen spontaani apoptoosi terapeuttisessa kantasoluvalmisteessa saa aikaan immunomodulatorisia vaikutuksia fosfatidyyliseriinin vapautumisen kautta.Signal Transduct Target Ther.2021, 14. heinäkuuta; 6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.JOS: 17.97: Dai Z, Liu H, Liao J, et ai.N7-metyyliguanosiinin tRNA:n modifikaatio tehostaa onkogeenista mRNA:n translaatiota ja edistää intrahepaattisen kolangiokarsinooman etenemistä.Mol Cell.2021 29. heinäkuuta: S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.JOS: 9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et ai.Mettl14-välitteinen m6A-modifikaatio helpottaa maksan uusiutumista ylläpitämällä endoplasmisen retikulumin homeostaasia.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
RNA-eristyssarjat muista näytelähteistäOvat saatavilla:
Solu, kasvi, virus, veri jne.
RNA:ta ei uuteta tai RNA:n saannot ovat alhaiset
Usein on useita eri tekijöitä, jotka vaikuttavat talteenottotehokkuuteen, kuten: kudosnäytteen RNA-pitoisuus, toimintatapa, eluointitilavuus jne.
1. Jäähaude tai kryogeeninen (4 °C) sentrifugointi suoritettiin käytön aikana.
Suositus: Käytä huoneenlämmössä (15-25 °C) koko prosessin ajan, älä jäähaudetta ja sentrifugoi matalissa lämpötiloissa.
2. Väärä näytteen säilytys tai liian pitkä näytteen säilytysaika.
Suositus: Säilytä näytteet -80 °C:ssa tai jäädytä nestetypessä ja vältä toistuvaa jäädytys-sulatuskäyttöä;yritä käyttää tuoretta kudosta tai viljeltyjä soluja RNA:n uuttamiseen.
3. Riittämätön näytteen hajoaminen.
Suositus: Kun homogenisoi kudosta, varmista, että kudos on riittävän homogenisoitunut ja että kudossolut ovat jakautuneet riittävästi selittääkseen RNA:n vapautumisen.
4. Eluenttia ei ole lisätty oikein.
Suositus: Varmista, että RNase-Free ddH2O:ta lisätään tipoittain puhdistuskolonnin kalvon keskelle.
5. Oikeaa määrää absoluuttista etanolia ei lisätty puskuriin RL2 tai puskuri RW2.
Suositus: Noudata ohjeita, lisää oikea määrä absoluuttista etanolia puskuriin RL2 ja puskuri RW2 ja sekoita hyvin ennen sarjan käyttöä.
6. Kudosnäytteen annostus ei ole sopiva.
Suositus: Käytä 10-20 mg kudosta tai (1-5) × 106soluja 500 μl:aa RL1-puskuria kohden, koska liiallinen kudosten käyttö voi heikentää RNA:n uuttamista.
7. Virheellinen eluointitilavuus tai epätäydellinen eluointi.
Suositus: Puhdistuskolonnin eluointitilavuus on 50-200 μl;jos eluutiovaikutus ei ole tyydyttävä, on suositeltavaa pidentää huoneenlämpöistä sijoitusaikaa esilämmitetyn RNase-Free ddH:n lisäämisen jälkeen2O, esim. 5-10 min.
8. Puhdistuspylväässä on etanolijäännöstä puskurin RW2 pesun jälkeen.
Suositus: Jos puskurin RW2 pesun, 1 minuutin tyhjän putken sentrifugoinnin jälkeen jää etanolia, tyhjän putken sentrifugoinnin aikaa voidaan pidentää 2 minuuttiin tai puhdistuskolonni voidaan asettaa huoneenlämpötilaan 5 minuutiksi etanolin jäännösten poistamiseksi riittävästi.
Puhdistettu RNA hajoaa
Puhdistetun RNA:n laatu liittyy tekijöihin, kuten näytteen säilymiseen, RNaasikontaminaatioon ja manipulointiin jne.
1. Kudosnäytteitä ei säilytetä ajoissa.
Suositus: Jos kudosnäytteitä tai soluja ei käytetä ajoissa keräämisen jälkeen, kylmäsäilytä välittömästi -80 °C:ssa tai nestetypessä.Käytä RNA:n erottamiseen vasta otettua kudos- tai solunäytettä aina kun mahdollista.
2. Kudosnäytteiden toistuva jäädytys-sulatus.
Suositus: Kudosnäytteitä säilytettäessä on parasta leikata ne pieniksi paloiksi säilytystä varten ja poistaa yksi palasista käytön aikana, jotta vältetään näytteen toistuva jäädytys-sulatus ja RNA:n hajoaminen.
3. RNase on lisätty tai se ei käytä kertakäyttökäsineitä, naamioita jne. toimenpiteen aikana.
Suositus: RNA-uuttokokeet tehdään parhaiten erillisissä RNA-käsittelyhuoneissa ja pöytä tyhjennetään ennen koetta.
Käytä kertakäyttökäsineitä ja naamioita kokeen aikana minimoimaan RNAasin aiheuttaman RNA:n hajoamisen.
4. Reagenssit kontaminoituvat RNaasilla käytön aikana.
Suositus: Korvaa uudella Animal Total RNA Isolation Kit -sarjalla vastaavia kokeita varten.
5. RNA:n käsittelyssä käytetyt sentrifugiputket, kärjet jne. ovat kontaminoituneet RNaasilla.
Suositus: Varmista, että RNA:n erottamisessa käytetyt sentrifugiputket, kärjet, pipetit jne. ovat kaikki RNaasivapaita.
Puhdistettu saatu RNA vaikuttaa alavirran kokeisiin
Puhdistuspylväällä puhdistettu RNA, jos suola-ionit, proteiinipitoisuus on liian suuri, vaikuttaa alavirran kokeeseen, kuten: käänteinen transkriptio, Northern Blot et ai.
1. Eluoidussa RNA:ssa on suolaionijäämiä.
Suositus: Varmista, että puskuriin RW2 on lisätty oikea määrä etanolia, ja suorita 2 puhdistuspylvään pesua käyttöön ilmoitetulla keskipakonopeudella;Jos suola-ionijäämiä on, jätä puhdistuspylväs puskuriin RW2 5 minuutiksi huoneenlämpötilaan ja suorita sentrifugointi suolakontaminaation poistamisen maksimoimiseksi.
2. Etanolijäännös eluoidussa RNA:ssa.
Suositus: Varmista, että puskurin RW2 pesun jälkeen suorita tyhjän putken sentrifugointi toiminnolle ilmoitetulla sentrifugointinopeudella, pidennä tyhjän putken sentrifugoinnin aikaa 2 minuuttiin, jos etanolia on vielä jäljellä, tai jätä se huoneenlämpöön 5 minuutiksi tyhjän putken sentrifugoinnin jälkeen maksimoidaksesi etanolijäämien poistumisen.
