Plant Total RNA Isolation Kit Plus Total RNA Purificaiton Kit kasveille, jotka sisältävät runsaasti polysakkarideja ja polyfenoleja
Sarjan kuvaus:
Luett.nro.RE-05021/05022/05024
Kokonais-RNA:n puhdistamiseen yleisistä kasvinäytteistä, jotka sisältävät runsaasti polysakkaridi- ja polyfenolikomponentteja.
Erota nopeasti korkealaatuista kokonais-RNA:ta kasvinäytteistä, joissa on paljon polysakkarideja ja polyfenoleja.
RNaasi-vapaa käyttämällä DNA-puhdistuskolonnia
Yksinkertainen – kaikki toiminnot suoritetaan huoneenlämmössä
Nopea – toiminta voidaan suorittaa 30 minuutissa
Turvallinen – ei käytetä orgaanista reagenssia 
Tekniset tiedot
50 valmistelua, 200 valmistelua
Sarja käyttää Foregenen kehittämää spin-kolonnia ja kaavaa, jolla voidaan tehokkaasti erottaa erittäin puhdasta ja laadukasta kokonais-RNA:ta erilaisista kasvikudoksista, joissa on korkea polysakkaridi- tai polyfenolipitoisuus.Se tarjoaa DNA-puhdistuspylvään, joka voi helposti poistaa genomisen DNA:n supernatantista ja kudoslysaatista.Vain RNA:ta sisältävä pylväs voi sitoa RNA:ta tehokkaasti.Sarja pystyy käsittelemään suuren määrän näytteitä samanaikaisesti.
Koko järjestelmä ei sisällä RNaasia, joten puhdistettu RNA ei hajoa.Puskuri PRW1 ja puskuri PRW2 voivat varmistaa, että saatu RNA ei ole proteiinin, DNA:n, ionien tai orgaanisten yhdisteiden saastuttama.
Sarjan komponentit
| Puskuri PSL1, puskuri PS, puskuri PSL2 |
| Puskuri PRW1, puskuri PRW2 |
| RNaasi-vapaa ddH2O, DNA-puhdistuskolonni |
| RNA-vain sarake |
Ominaisuudet ja edut
■ Toiminta huoneenlämmössä (15-25 ℃) koko prosessin ajan ilman jäähaudetta ja matalan lämpötilan sentrifugointia.
■ Täydellinen RNaasi-vapaa sarja, ei tarvitse huolehtia RNA:n hajoamisesta.
■ Soveltuu erityisen hyvin RNA:n puhdistukseen polysakkaridien ja polyfenolien kasvinäytteistä.
■ DNA-Cleaning Column sitoutuu spesifisesti DNA:han, joten pakkaus voi poistaa genomisen DNA:n kontaminaation lisäämättä DNaasia.
■ Korkea RNA:n saanto: Vain RNA:ta sisältävä pylväs ja ainutlaatuinen kaava voivat puhdistaa RNA:ta tehokkaasti.
■ Nopea nopeus: helppo käyttää ja voidaan suorittaa 30 minuutissa.
■ Turvallisuus: orgaanista reagenssia ei tarvita.
■ Korkea laatu: Puhdistetut RNA-fragmentit ovat erittäin puhtaita, vapaita proteiineista ja muista epäpuhtauksista, ja ne soveltuvat erilaisiin loppupään kokeisiin.
Tuotteen parametrit
■ Alavirran sovellukset: ensimmäisen juosteen cDNA-synteesi, RT-PCR, molekyylikloonaus, Northern blot jne.
■ Näyte: Tuoreet tai jäädytetyt kasvikudokset polysakkarideista ja polyfenoleista
■ Annostus: 50 mg kasvikudosta
■ Puhdistuskolonnin suurin RNA-sitoutumiskyky: 80 μg
■ Eluointitilavuus: 50-200 μl
Kit-sovellus
Se soveltuu kokonais-RNA:n uuttamiseen ja puhdistamiseen tuoreista tai pakastetuista kasvikudosnäytteistä (erityisesti tuoreesta kasvin lehtikudoksesta), joissa on korkea polysakkaridi- ja polyfenolipitoisuus.
Työnkulku
Kaavio
Plant Total RNA Isolation Kit Plus käsitteli 50 mg tuoreita polysakkaridien ja polyfenolien lehtiä, ja 5 % puhdistettua RNA:ta testattiin elektroforeesilla.
1: Banaani
2: Ginkgo
3: puuvillaa
4: granaattiomena
Varastointi ja säilyvyys
Tätä sarjaa voidaan säilyttää 24 kuukautta kuivissa olosuhteissa huoneenlämmössä (15-25 ℃);Jos sitä on säilytettävä pidempään, se voidaan säilyttää 2–8 ℃:ssa.
Puskuri PSL1 voidaan asettaa 4 ℃:seen 1 kuukaudeksi β-merkaptoetanolin lisäämisen jälkeen (on suositeltavaa lisätä se samaan aikaan kokeessa).
Pylväs tukossa
Kun kolonni on tukkeutunut, RNA:n saanto vähenee tai jopa mahdotonta puhdistaa RNA:ta, ja saatu RNA-massa on pieni.
Yleisten syiden analyysi:
1. Näytteiden tauot eivät ole perusteellisia.
Näytteen rikkoutuminen ei täysin tukkeudu DNA-PUHDISTUSKOLUMNIIN, vaikka se vaikuttaa RNA:n saantoon ja laatuun.Suosittelemme nopeaa jauhatusta riittävässä nestetypessä, kun rikot näytteet. Yritä murskata näytteen soluseinä, solukalvo ja muu kudos.Polyolipolysakkaridien kasvinäytteisiin suosittelemme Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS -sarjan käyttöä.
2. Kun erotettu näytteen supernatantti imetään DNA-puhdistuskolonnilla, mahdollinen solufragmentoitunut sakka voidaan hengittää.
Otetut solufragmentoidut sedimentit aiheuttavat RNA-ONLY -pylvään, joka tukkeutuu, kun RNA:n adsorptiotoiminto suoritetaan (katso vaihe 6).Suosittelemme, että imetät tätä supernatanttia huolellisesti, jotta solujätteet eivät imeydy.
3. Näytteen alkuperäinen määrä on liian suuri.
Liiallinen näytteen käyttö johtaa näytteen epätäydelliseen fragmentoitumiseen tai epätäydelliseen solulyysiin puskurilla PSL1, mikä johtaa puhdistuspylvään tukkeutumiseen puhdistuksen aikana.Plant Total RNA Isolation Kit Jokainen yksittäinen puhdistettu toimintanäyte on 50 mg.Polyolipolysakkaridien kasvinäytteitä varten suosittelemme Plant Total RNA -eristyspakkaus PLUS -tuotteen kokeilemista.
4. Sentrifugin lämpötila on liian alhainen.
Koko RNA:n eristys- ja puhdistusprosessi suoritetaan huoneenlämpötilassa (20-25°C), paitsi että nestemäinen typpi rikkoo näytekudoksen. Joidenkin kryogeenisten sentrifugien lämpötila on alle 20℃, joka voi aiheuttaa DNA-puhdistuskolonnin ja/tai RNA-vain kolonnin tukkeutumisen.Jos näin tapahtuu, aseta sentrifugin lämpötilaksi 20-25 astetta℃, javarmista, että lyysiseos ja/tai etanolilla lisätty supernatantti esilämmitettiin 37 °C:seen°C.
RNA:ta ei uuteta tai RNA:n saanto on alhainen
Talteenottotehokkuuteen vaikuttavat yleensä monet tekijät, kuten: näytteen RNA-pitoisuus, toimintatapa, eluointitilavuus jne.
Analyysi yleisistä syistä alla:
1. Toimenpiteen aikana suoritettiin jäähaude tai matalan lämpötilan (4 °C) sentrifugointi.
Suositus: Käytä huoneenlämmössä (15-25°C) älä tee jäähaudetta ja matalan lämpötilan sentrifugointia koko prosessin aikana.
2. RNA on hajonnut näytteen väärän säilytyksen tai näytteen pitkäaikaisen säilytyksen vuoksi.
Suositus: Juuri kerätyt näytteet tulee jäädyttää nopeasti nestetypessä ja säilyttää sitten -80°C:ssa pitkään, välttää näytteiden toistuvaa jäätymistä ja sulattamista;tai liota näytteet välittömästi RNA-stabilisaattori RNAlater-liuoksessa (eläinnäytteet).
3. Riittämätön näytteen fragmentoituminen ja hajoaminen johtavat puhdistuskolonnin tukkeutumiseen.
Ehdotus: Kun kudosta hiotaan, varmista, että kudos on jauhettu riittävästi, ja siirrä se nopeasti esivalmistettuun puskuriin PSL1 (varmista, että β-ME:tä on lisätty oikea määrä, katso toimenpiteen vaihe 1).
4. Eluentti lisättiin väärin.
Suositus: Varmista, että RNase-Free ddH2O tiputetaan puhdistuskolonnin kalvon keskelle.
5. Oikeaa määrää absoluuttista etanolia ei lisätty puskuriin PSL2 tai puskuri PRW2.
Suositus: Noudata ohjeita, lisää oikea määrä absoluuttista etanolia puskuriin PSL2 ja puskuri PRW2 ja sekoita hyvin ennen sarjan käyttöä.
6. Kudosnäytteen määrä on sopimaton.
Suositus: Käytä 50 mg kudosta per 500 μl puskuria PSL1.Liian suuren kudoksen käyttö vähentää uutetun RNA:n määrää ja myös tuloksena olevan RNA:n puhtaus heikkenee.Suosittelemme voimakkaasti, että alkuperäinen näyteannos ei saisi ylittää 50 mg RNA:n uuttooperaatiota kohden.
7.Väärä eluutiotilavuus tai epätäydellinen eluointi.
Suositus: Puhdistuskolonnin eluenttitilavuus on 50-200 μl;jos eluutiovaikutus ei ole tyydyttävä, on suositeltavaa pidentää aikaa huoneenlämmössä esilämmitetyn RNase-Free ddH2O:n lisäämisen jälkeen, esim. 5-10 min.
8. Puhdistuspylväässä on etanolijäännös BufferPRW2:lla pesun jälkeen.
Suositus: Jos tyhjää putkea sentrifugoidaan 1 minuutin ajan ja etanolia on vielä jäljellä puskurissa PRW2 pesun jälkeen, voit pidentää tyhjän putken sentrifugointiaikaa 2 minuuttiin tai asettaa puhdistuskolonni huoneenlämpötilaan 5 minuutiksi etanolin jäännösten poistamiseksi kokonaan.
9. Sarjaa on käytetty väärin.
Ehdotus: Polyfenolipolysakkaridien kasvinäytteille ei ehkä voida saada ihanteellisia RNA-näytteitä käyttämällä yleisiä sarjoja, kuten Plant Total RNA Isolation Kit.Suosittelemme käyttämään Plant Total RNA IsolationKit Plus -pakkausta, joka on erityisesti suunniteltu polyfenolipolysakkaridien kasvinäytteisiin.Sarja, joka on erityisesti kehitetty RNA:n uuttamiseen polyfenoli- ja polysakkaridikasvinäytteistä.
OD260/OD280-arvo on alhainen
RNA-eluointi ddH2O:lla ja käytetty spektrofotometrin lukemiin johtaa alhaisiin OD260/OD280-arvoihin.Suosittelemme käyttämään 10 mM Tris-HCl:a, pH 7,5 (RNaasittoman ddH2O:n sijaan RNA:n eluoimiseen) suhteellisen oikeiden OD260/OD280-arvojen saamiseksi. Katso ”RNA:n konsentraatio- ja puhdistusmääritykset” sivulla 19.
Puhdistettu RNA hajoaa
Puhdistetun RNA:n laatu liittyy sellaisiin tekijöihin kuin näytteen säilyminen, RNaasikontaminaatio ja manipulointi.
Yleisten syiden analyysi:
1. Kudosnäytteitä ei säilytetty ajoissa keräämisen jälkeen.
Suositus: Jos kudosnäytteitä ei käytetä ajoissa keräyksen jälkeen, säilytä ne välittömästi nestetypessä alhaisessa lämpötilassa tai siirrä ne -80°C:seen pitkäaikaista säilytystä varten pikajäädytyksen jälkeen nestetypessä tai upota näytteet välittömästi RNA-stabilisaattori RNAlater-liuokseen (eläinnäytteet ).Yritä käyttää RNA:n uuttamiseen juuri kerättyjä kudosnäytteitä.
2. Kudosnäytteiden toistuva jäädytys ja sulatus.
Suositus: Kudosnäytteitä säilytettäessä on parasta leikata ne pieniksi paloiksi säilytystä varten ja ottaa niistä osa pois käytettäessä, jotta vältetään näytteiden toistuvan pakastamisen ja sulatuksen aiheuttama RNA:n hajoaminen.
3.RNase tuodaan leikkaussaliin tai kertakäyttökäsineitä, naamioita jne. ei ole käytetty.
Ehdotus: RNA-uuttokokeet on parasta tehdä erillisinä RNA-operaatioina, ja laboratoriopöytä tulee puhdistaa ennen koetta ja käyttää kertakäyttökäsineitä ja -naamioita kokeen aikana, jotta vältetään RNAasin aiheuttama RNA:n hajoaminen suurimmassa määrin.
4. Reagenssi on kontaminoitunut RNaasilla käytön aikana.
Ehdotus: Korvaa uudella sarjalla kasvien kokonais-RNA:n uuttopakkauksia vastaavia kokeita varten.
5. RNA:n käsittelyyn käytetyt sentrifugiputket ja pipetin kärjet ovat kontaminoituneet RNaasilla.
Ehdotus: Varmista, että RNA:n erottamisessa käytetyt sentrifugiputket, pipetinkärjet, pipetit jne. ovat kaikki RNaasivapaita.
Käyttöohjeet:
Plant Total RNA Isolation Kit Plus -käyttöopas
