Solun kokonais-RNA:n eristyspakkaus Kokonais-RNA:n eristyspuhdistussarjat solusta
Sarjan kuvaus:
Erittäin puhdistettua ja korkealaatuista kokonais-RNA:ta voidaan saada erilaisista viljellyistä soluista 11 minuutissa.
RNaasi-vapaa
Toimii huoneenlämmössä (15-25℃)
DNA-puhdistuskolonnilla
Korkea RNA-saanto
Nopea: Lopeta uutto 11 minuutissa
Turvallisuus: Ei mitään Orgaaninen kemikaali
Kuvaus
Tämä pakkaus käyttää Foregenen kehittämää spin-kolonnia ja kaavaa, joka voi tehokkaasti uuttaa erittäin puhdasta ja korkealaatuista kokonais-RNA:ta soluista, joita on viljelty 96-, 24-, 12- ja 6-kuoppalevyillä.
Sarja tarjoaa tehokkaan DNA-puhdistuspylvään, joka voi helposti erottaa supernatantin ja solulysaatin, sitoa ja poistaa genomisen DNA:n.Toiminta on yksinkertaista ja aikaa säästävää.
TVain RNA:ta sisältävä pylväs voi tehokkaasti sitoa RNA:ta ainutlaatuisella kaavalla.Suuri määrä näytteitä voidaan käsitellä samanaikaisesti.
Sarjan komponentit
| Sarjan koostumus | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Puskuri cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Puskuri cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Puskuri RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Puskuri RW2 | 24 ml | 96 ml |
| RNaasi-vapaa ddH2O | 10 ml | 40 ml |
| RNA-vain sarake | 50 | 200 |
| DNA-puhdistuskolonni | 50 | 200 |
| Ohje | 1 | 1 |
*Käytä käsineitä ja ryhdy suojatoimenpiteisiin käytön aikana, koska puskuri cRL1 ja puskuri RW1 sisältävät ärsyttäviä kaotrooppisia suoloja.
Ominaisuudet ja edut
■ Koko prosessi suoritetaan huoneenlämmössä (15-25 ℃), ilman jäähaudetta ja matalan lämpötilan sentrifugointia.
■ Koko pakkaus on RNaasi-vapaa, ei tarvitse huolehtia RNA:n hajoamisesta.
■ DNA-puhdistuskolonni sitoo spesifisesti DNA:ta, joten pakkaus voi poistaa genomisen DNA-kontaminaation lisäämättä DNaasia.
■ Korkea RNA:n saanto: Vain RNA:ta sisältävä pylväs ja ainutlaatuinen kaava voivat puhdistaa RNA:ta tehokkaasti.
■ Nopea nopeus: helppo käyttää ja voidaan suorittaa 11 minuutissa.
■ Turvallisuus: Orgaanista reagenssia ei tarvita.
■ Korkea laatu: Puhdistettu RNA on erittäin puhdasta, vapaa proteiinista ja muista epäpuhtauksista, ja se soveltuu useisiin myöhempään kokeeseen.
Kit-sovellus
Se soveltuu kokonais-RNA:n uuttamiseen ja puhdistamiseen viljellyistä soluista 96-, 24-, 12- ja 6-kuoppalevyillä.
Työnkulku
Kaavio
Cell Total RNA Isolation Kitin agaroosigeeliparistokaavio käsitteli yllä olevat eri solumäärät, 20 μl:n tilavuuseluointi, ota 2 μl puhdistettua kokonais-RNA:ta 1 %.
Varastointi ja säilyvyys
Sarjaa voidaan säilyttää 12 kuukautta huoneenlämmössä (15–25 ℃) tai 2–8 ℃ pidempään (24 kuukautta).
Puskuri cRL1 voidaan säilyttää 4 ℃:ssa 1 kuukauden ajan 2-hydroksi-1-etaanitiolin (valinnainen) lisäämisen jälkeen.
RNA:ta ei uuteta tai RNA:n saannot ovat alhaiset
Usein on useita eri tekijöitä, jotka vaikuttavat talteenottotehokkuuteen, kuten: kudosnäytteen RNA-pitoisuus, toimintatapa, eluointitilavuus jne.
1. Jäähaude tai kryogeeninen (4 °C) sentrifugointi suoritettiin käytön aikana.
Suositus: Käytä huoneenlämmössä (15-25 °C) koko prosessin ajan, älä jäähaudetta ja sentrifugoi matalissa lämpötiloissa.
2. Väärä näytteen säilytys tai liian pitkä näytteen säilytysaika.
Suositus: Säilytä näytteet -80 °C:ssa tai jäädytä nestetypessä ja vältä toistuvaa jäädytys-sulatuskäyttöä;yritä käyttää tuoretta kudosta tai viljeltyjä soluja RNA:n uuttamiseen.
3. Riittämätön näytteen hajoaminen.
Suositus: Kun homogenisoi kudosta, varmista, että kudos on riittävän homogenisoitunut ja että kudossolut ovat jakautuneet riittävästi selittääkseen RNA:n vapautumisen.
4. Eluenttia ei ole lisätty oikein.
Suositus: Varmista, että RNase-Free ddH2O:ta lisätään tipoittain puhdistuskolonnin kalvon keskelle.
5. Oikeaa määrää absoluuttista etanolia ei lisätty puskuriin RL2 tai puskuri RW2.
Suositus: Noudata ohjeita, lisää oikea määrä absoluuttista etanolia puskuriin RL2 ja puskuri RW2 ja sekoita hyvin ennen sarjan käyttöä.
6. Kudosnäytteen annostus ei ole sopiva.
Suositus: Käytä 10-20 mg kudosta tai (1-5) × 106soluja 500 μl:aa RL1-puskuria kohden, koska liiallinen kudosten käyttö voi heikentää RNA:n uuttamista.
7. Virheellinen eluointitilavuus tai epätäydellinen eluointi.
Suositus: Puhdistuskolonnin eluointitilavuus on 50-200 μl;jos eluutiovaikutus ei ole tyydyttävä, on suositeltavaa pidentää huoneenlämpöistä sijoitusaikaa esilämmitetyn RNase-Free ddH:n lisäämisen jälkeen2O, esim. 5-10 min.
8. Puhdistuspylväässä on etanolijäännöstä puskurin RW2 pesun jälkeen.
Suositus: Jos puskurin RW2 pesun, 1 minuutin tyhjän putken sentrifugoinnin jälkeen jää etanolia, tyhjän putken sentrifugoinnin aikaa voidaan pidentää 2 minuuttiin tai puhdistuskolonni voidaan asettaa huoneenlämpötilaan 5 minuutiksi etanolin jäännösten poistamiseksi riittävästi.
Puhdistettu RNA hajoaa
Puhdistetun RNA:n laatu liittyy tekijöihin, kuten näytteen säilymiseen, RNaasikontaminaatioon ja manipulointiin jne.
1. Kudosnäytteitä ei säilytetä ajoissa.
Suositus: Jos kudosnäytteitä tai soluja ei käytetä ajoissa keräämisen jälkeen, kylmäsäilytä välittömästi -80 °C:ssa tai nestetypessä.Käytä RNA:n erottamiseen vasta otettua kudos- tai solunäytettä aina kun mahdollista.
2. Kudosnäytteiden toistuva jäädytys-sulatus.
Suositus: Kudosnäytteitä säilytettäessä on parasta leikata ne pieniksi paloiksi säilytystä varten ja poistaa yksi palasista käytön aikana, jotta vältetään näytteen toistuva jäädytys-sulatus ja RNA:n hajoaminen.
3. RNase on lisätty tai se ei käytä kertakäyttökäsineitä, naamioita jne. toimenpiteen aikana.
Suositus: RNA-uuttokokeet tehdään parhaiten erillisissä RNA-käsittelyhuoneissa ja pöytä tyhjennetään ennen koetta.
Käytä kertakäyttökäsineitä ja naamioita kokeen aikana minimoimaan RNAasin aiheuttaman RNA:n hajoamisen.
4. Reagenssit kontaminoituvat RNaasilla käytön aikana.
Suositus: Korvaa uudella Animal Total RNA Isolation Kit -sarjalla vastaavia kokeita varten.
5. RNA:n käsittelyssä käytetyt sentrifugiputket, kärjet jne. ovat kontaminoituneet RNaasilla.
Suositus: Varmista, että RNA:n erottamisessa käytetyt sentrifugiputket, kärjet, pipetit jne. ovat kaikki RNaasivapaita.
Puhdistettu saatu RNA vaikuttaa alavirran kokeisiin
Puhdistuspylväällä puhdistettu RNA, jos suola-ionit, proteiinipitoisuus on liian suuri, vaikuttaa alavirran kokeeseen, kuten: käänteinen transkriptio, Northern Blot et ai.
1. Eluoidussa RNA:ssa on suolaionijäämiä.
Suositus: Varmista, että puskuriin RW2 on lisätty oikea määrä etanolia, ja suorita 2 puhdistuspylvään pesua käyttöön ilmoitetulla keskipakonopeudella;Jos suola-ionijäämiä on, jätä puhdistuspylväs puskuriin RW2 5 minuutiksi huoneenlämpötilaan ja suorita sentrifugointi suolakontaminaation poistamisen maksimoimiseksi.
2. Etanolijäännös eluoidussa RNA:ssa.
Suositus: Varmista, että puskurin RW2 pesun jälkeen suorita tyhjän putken sentrifugointi toiminnolle ilmoitetulla sentrifugointinopeudella, pidennä tyhjän putken sentrifugointiaikaa 2 minuuttiin, jos etanolia on vielä jäljellä, tai jätä se huoneenlämpöön 5 minuutiksi
