(96-kuoppainen) QuickEasy Cell Direct RT-qPCR Kit – Taqman
Kuvaukset
The(96-kuoppainen) QuickEasyTM Cell Direct RT-qPCR Kit–Taqmantarjoaaainutlaatuinen lyysipuskurijärjestelmäto vapauttaa nopeasti RNA:taviljellystä solustanäytteitä RT-qPCR-reaktioihin, mikä eliminoi aikaa vievän ja työlänRNA:n puhdistusprosessi, ja vaaditun RNA-templaatin saaminen kestää vain 7 minuuttia.The5× Direct RT Mixja2× Direct qPCR Mix-SYBRtoimitettu laatikossa voi nopeasti jasaada tehokkaasti reaaliaikaisia määrällisiä tietojaPCR-tulokset.
5× Direct RT Mix ja 2× Direct qPCR Mix-Taqman sietävät voimakkaasti inhibiittoria, ja ne voivat käyttää testattavan näytteen lysaattia templaattina tehokkaan käänteistranskription ja spesifisen monistuksen aikaansaamiseksi.Reagenssi sisältää ainutlaatuista Foregene käänteistranskriptaasia, jolla on korkea affiniteetti RNA:ta kohtaan, sekä Hot D-Taq DNA -polymeraasia, dNTP:itä, MgCl:a.2 , reaktiopuskuri, PCR-optimoija ja stabilointiaine, ja sitä voidaan käyttää yhdessä lyysipuskurin kanssa näytteen havaitsemiseen nopeasti, helposti ja tarkasti, ja sillä on korkea herkkyys, vahva spesifisyys ja hyvä stabiilisuus.
Kitti on tarkoitettu 96-kuoppaisten viljeltyjen solujen mikrosysteemilyysiin, ja sillä on hyvä yhtenäisyys ja konsistenssi;pakkauksen komponentit tarjoavat 96 lyysireaktiota, 96 käänteistranskriptioreaktiota ja 96 × 2 qPCR-reaktiota, jotka voivat täyttää 96-kuoppaisen solulevyn kertakäyttöä varten, välttäen reagenssien toistuvan avaamisen, jäätymisen ja sulatuksen aiheuttaman saastumisen ja reagenssien suorituskyvyn heikkenemisen.
Sarjan komponentit
| Sarjan koostumus ( 50 μL lyysijärjestelmä/20 μlRT reaktiojärjestelmä /20μL qPCR-reaktiojärjestelmä) | DRT-03021 | Huomautus | |
| 96T | |||
| OsaI | PuskuriCL | 5 ml | CellLyys |
| ForegeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| PuskuriST | 500 μL | ||
| Osa II | DNAPyyhekumi | 100 μL | |
| 5× Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50× ROX-referenssiväri | 400µl | ||
| RNaasi- VapaaddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Mvuosittainen | 1 pala | 1 annos | |
*: Hajotusreagenssi DNA Eraser sisältyy pakkauksen osaan II;Cell Lysis-, RT- ja qPCR-komponentit voidaan ostaa erikseen.
Ominaisuudet ja edut
■Yksinkertainen ja tehokas: Cell Direct RT -tekniikalla RNA-näytteet voidaan saada vain 7 minuutissa.
■ Näytteen tarve on pieni, jopa 10 solua voidaan testata.
■ Suuri suorituskyky: se pystyy nopeasti havaitsemaan RNA:n soluista, joita on viljelty 384-, 96-, 24-, 12- ja 6-kuoppalevyillä.
■ DNA Eraser voi nopeasti poistaa vapautuneet genomit, mikä vähentää huomattavasti vaikutusta myöhempien kokeiden tuloksiin.
■ Optimoitu RT- ja qPCR-järjestelmä tekee kaksivaiheisesta RT-PCR-käänteistranskriptiosta tehokkaampaa ja PCR:stä spesifisemmän ja vastustuskykyisemmän RT-qPCR-reaktion estäjille.
Kit-sovellus
Soveltamisala: viljellyt solut.
- Näytteen lyysillä vapautunut RNA: koskee vain tämän pakkauksen RT-qPCR-templaattia.
- Sarjaa voidaan käyttää seuraaviin tarkoituksiin: geenien ilmentymisanalyysi, siRNA-välitteisen geenin hiljennysvaikutuksen todentaminen, lääkeseulonta jne.
Varastointi ja säilyvyys
Tämän sarjan osa I tulee säilyttää 4℃;Osa II tulee säilyttää -20 ℃:ssa.
Foregene Protease Plus II tulee säilyttää 4 °C:ssa℃, älä jäädytä -20 ℃.
Reagenssi 2×Direct qPCR Mix-Taqman tulee säilyttää -20 °C:ssa℃pimeässä;jos sitä käytetään usein, se voidaan säilyttää myös 4℃ lyhytaikaiseen varastointiin (käytä 10 päivän kuluessa).
Reaaliaikainen PCR-alukkeen suunnitteluperiaatteet
Forward Primer ja Reverse Primer
Reaaliaikaisessa PCR:ssä alukkeen suunnittelu on erittäin tärkeää.Alukkeet liittyvät PCR-monistuksen spesifisyyteen ja tehokkuuteen, ja ne voidaan suunnitella seuraavien periaatteiden mukaisesti:
- Alukkeen pituus: 18-30 bp.
- GC-pitoisuus: 40-60 %.
- Tm-arvo: Primer-suunnitteluohjelmisto, kuten Primer 5, voi antaa pohjamaalin Tm-arvon.Ylävirran ja alavirran alukkeiden Tm-arvojen tulisi olla mahdollisimman lähellä.Myös Tm-laskentakaavaa voidaan käyttää: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR:ää suoritettaessa pariutumislämpötilaksi valitaan yleensä lämpötila, joka on alle alukkeen Tm-arvon 5 °C (vastaava pariutumislämpötilan nousu voi lisätä PCR-reaktion spesifisyyttä).
- Alukkeet ja PCR-tuotteet:
- Suunnittelualukkeen PCR-amplifikaatiotuotteen pituus on edullisesti 100-150 bp.
- Suunnittelupohjamaaleja mallin toissijaisessa rakennealueella tulee välttää mahdollisimman paljon.
- Vältä kahden tai useamman komplementaarisen emäksen muodostumista ylävirran ja alavirran alukkeiden 3'-päiden väliin.
- Primer 3′ -liitinpohjaa ei voi olla läsnä 3 ylimääräisellä peräkkäisellä G:llä tai C:llä.
- Itse alukkeilla ei voi olla komplementaarisia rakenteita, muuten muodostuu hiusneularakenne, joka vaikuttaa PCR-monistukseen.
- ATCG tulee jakaa mahdollisimman tasaisesti alukesekvenssissä, ja 3'-terminaalista emästä tulee välttää T:nä.
Liite1:Cell SuoraRT-qPCR Sarjan komponenttit lisäpaketti
1. Soluhajotusliuos
| Soluhajotusliuos | |||
| Sarjan komponentit (24-kuoppainen lyysijärjestelmä / kuoppa) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Osaminä | Puskuri CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Puskuri ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| OsaII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Sarjan komponentit (20 μl:n reaktiojärjestelmä) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNaasi-vapaa ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR-sekoitus | ||
| Sarjan komponentit (20 μl:n reaktiojärjestelmä) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX-referenssiväri | 40 μl | 200 μl |
| RNaasi-vapaa ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Käyttöohjeet:
