Cell Direct RT qPCR Kit – Taqman Direct Cell Lysis Cell Ready Yksivaiheinen qRT-PCR Kits -koetin
Kuvaukset
Tämä tuote käyttää ainutlaatuista lyysipuskurijärjestelmää RNA:n nopeaan vapauttamiseen viljellyistä solunäytteistä RT-qPCR-reaktioita varten, mikä eliminoi aikaa vievän ja työlän RNA:n puhdistusprosessin ja vain 7 minuuttia tarvittavan RNA-templaatin saamiseksi. 5× Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman tuottaa reaaliaikaisia ja kvantitatiivisia tuloksia nopeasti ja nopeasti.
5× Direct RT Mix ja 2× Direct qPCR Mix-Taqman sietävät hyvin inhibiittoria, ja ne voivat suorittaa tehokkaan käänteisen ja spesifisen monistuksen käyttämällä mitattavan näytteen lysaattia templaattina.Reagenssi sisältää Foregene-käänteistranskriptaasia, Hot D-Taq DNA -polymeraasia, dNTP:itä, MgCl:a2, reaktiopuskuri, PCR-optimoija ja stabilisaattori, joita voidaan käyttää lyysipuskurin kanssa näytteiden nopeaan ja helposti havaitsemiseen, ja joilla on korkea herkkyys, spesifisyys ja stabiilisuus.
Tekniset tiedot
200×20μl Rxns, 1000×20μl Rxns
Sarjan komponentit
| QuickEasyTMCell Direct RT-qPCR Kit-Taqman | ||||
| Sarjan komponentit 20 μl qPCR-reaktiojärjestelmä | DRT-01021 | DRT-01022 | Huomautus | |
| 200 T | 1000 T | |||
|
Osa I | Puskuri CL | 4 ml | 20 ml | Solujen lyysi |
| Foregene Protease Plus II | 80 μl | 400 μl | ||
| Puskuri ST | 400 μl | 1 ml × 2 | ||
|
Osa II | DNA Eraser | 80 μl | 400 μl | |
| 5×Direct RT Mix * | 160 μl | 800 μl | RT | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman * | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 | qPCR | |
| 20×ROX-referenssiväri | 40 μl | 200 μl | ||
| RNaasi-vapaa ddH2O | 1,7 ml | 10 ml | ||
| Käyttöopas | 1 kpl | 1 kpl | ||
*:Cell Lysis, 5×Direct RT Mix, 2× Direct qPCR Mix-Taqman voidaan ostaa erikseen
Ominaisuudet ja edut
■Yksinkertainen ja tehokas: Cell Direct RT -tekniikalla RNA-näytteet voidaan saada vain 7 minuutissa.
■ Näytteen tarve on pieni, jopa 10 solua voidaan testata.
■ Suuri suorituskyky: se pystyy nopeasti havaitsemaan RNA:n soluista, joita on viljelty 384-, 96-, 24-, 12- ja 6-kuoppalevyillä.
■ DNA Eraser voi nopeasti poistaa vapautuneet genomit, mikä vähentää huomattavasti vaikutusta myöhempien kokeiden tuloksiin.
■ Optimoitu RT- ja qPCR-järjestelmä tekee kaksivaiheisesta RT-PCR-käänteistranskriptiosta tehokkaampaa ja PCR:stä spesifisemmän ja vastustuskykyisemmän RT-qPCR-reaktion estäjille.
Kit-sovellus
Soveltamisala: viljellyt solut.
- Näytteen lyysillä vapautunut RNA: koskee vain tämän pakkauksen RT-qPCR-templaattia.
- Sarjaa voidaan käyttää seuraaviin tarkoituksiin: geenien ilmentymisanalyysi, siRNA-välitteisen geenin hiljennysvaikutuksen todentaminen, lääkeseulonta jne.
Varastointi ja säilyvyys
Tämän sarjan osa I tulee säilyttää 4℃;Osa II tulee säilyttää -20 ℃:ssa.
Foregene Protease Plus II tulee säilyttää 4 °C:ssa℃, älä jäädytä -20 ℃.
Reagenssi 2×Direct qPCR Mix-Taqman tulee säilyttää -20 °C:ssa℃pimeässä;jos sitä käytetään usein, se voidaan säilyttää myös 4℃ lyhytaikaiseen varastointiin (käytä 10 päivän kuluessa).
Reaaliaikainen PCR-alukkeen suunnitteluperiaatteet
Forward Primer ja Reverse Primer
Reaaliaikaisessa PCR:ssä alukkeen suunnittelu on erittäin tärkeää.Alukkeet liittyvät PCR-monistuksen spesifisyyteen ja tehokkuuteen, ja ne voidaan suunnitella seuraavien periaatteiden mukaisesti:
- Alukkeen pituus: 18-30 bp.
- GC-pitoisuus: 40-60 %.
- Tm-arvo: Primer-suunnitteluohjelmisto, kuten Primer 5, voi antaa pohjamaalin Tm-arvon.Ylävirran ja alavirran alukkeiden Tm-arvojen tulisi olla mahdollisimman lähellä.Myös Tm-laskentakaavaa voidaan käyttää: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).PCR:ää suoritettaessa pariutumislämpötilaksi valitaan yleensä lämpötila, joka on alle alukkeen Tm-arvon 5 °C (vastaava pariutumislämpötilan nousu voi lisätä PCR-reaktion spesifisyyttä).
- Alukkeet ja PCR-tuotteet:
- Suunnittelualukkeen PCR-amplifikaatiotuotteen pituus on edullisesti 100-150 bp.
- Suunnittelupohjamaaleja mallin toissijaisessa rakennealueella tulee välttää mahdollisimman paljon.
- Vältä kahden tai useamman komplementaarisen emäksen muodostumista ylävirran ja alavirran alukkeiden 3'-päiden väliin.
- Primer 3′ -liitinpohjaa ei voi olla läsnä 3 ylimääräisellä peräkkäisellä G:llä tai C:llä.
- Itse alukkeilla ei voi olla komplementaarisia rakenteita, muuten muodostuu hiusneularakenne, joka vaikuttaa PCR-monistukseen.
- ATCG tulee jakaa mahdollisimman tasaisesti alukesekvenssissä, ja 3'-terminaalista emästä tulee välttää T:nä.
Liite1:Cell SuoraRT-qPCR Sarjan komponenttit lisäpaketti
1. Soluhajotusliuos
| Soluhajotusliuos | |||
| Sarjan komponentit (24-kuoppainen lyysijärjestelmä / kuoppa) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Osaminä | Puskuri CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Puskuri ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| OsaII | DNA Eraser | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Sarjan komponentit (20 μl:n reaktiojärjestelmä) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5× Direct RT Mix | 800 μl |
| RNaasi-vapaa ddH2O | 1,7 ml × 2 |
| qPCR-sekoitus | ||
| Sarjan komponentit (20 μl:n reaktiojärjestelmä) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× Direct qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20× ROX-referenssiväri | 40 μl | 200 μl |
| RNaasi-vapaa ddH2O | 1,7 ml | 10 ml |
Käyttöohjeet:
