Reaaliaikainen PCR Easyᵀᴹ-Taqman
Sarjan kuvaukset
2X Real PCR EasyTMMix-Taqman tarjoaa Real Time PCR EasyTM-Taqman Kit on uusi esisekoitusjärjestelmä, joka käyttää erityisiä fluoresoivia koettimia reaaliaikaisiin PCR-amplifikaatioreaktioihin, mikä voi parantaa huomattavasti tuotteen spesifisyyttä ja reaktioherkkyyttä.ROX toimitetaan sisäisenä kontrollivärinä.
2X Real PCR EasyTMMix-Taqman sisältää Foregenen ainutlaatuista kuumakäynnistystä Taq DNA Polymerase.Tavallisiin Taq-entsyymeihin verrattuna sen etuna on korkea amplifikaatiotehokkuus, vahva spesifinen monistuskyky ja alhainen yhteensopimattomuusaste.Se voi vähentää epäspesifistä monistumista ja parantaa PCR:n tarkkuutta.
Tekniset tiedot
Reaaliaikainen PCR helppoTM-Taqman | ||||
Sarjan koostumus (20 μl järjestelmä) | QP-01021 | QP-01022 | QP-01023 | QP-01024 |
200T | 500T | 1000T | 2000T | |
2×Todellinen PCRHelppoTMSekoita-Taqman | 1 ml ×2 | 1.7 ml ×3 | 1.7 ml ×6 | 1.7 ml ×12 |
20×ROX-referenssiväriaine | 200 μl | 0.5ml | 1 ml | 1 ml × 2 |
DNaasi-vapaa ddH2O | 1,7 ml | 1.7 ml ×2 | 10 ml | 20 ml |
Iohje | 1 | 1 | 1 | 1 |
Ominaisuudet ja edut
■ Yksinkertainen – 2X PCR-sekoitus vähentää kokeellisia virheitä ja toiminta-aikaa
■ Spesifinen – optimoitu puskuri ja kuumakäynnistys Taq-entsyymi voivat estää epäspesifisen monistumisen ja alukedimeerin muodostumisen
■ Suuri herkkyys – voi havaita mallin alhaiset kopiot
■ Hyvä monipuolisuus – yhteensopiva useimpien reaaliaikaisten kvantitatiivisten PCR-laitteiden kanssa
Kit-sovellus
qPCR-analyysi
Työnkulku
Graafinen
Varastointi ja säilyvyys
Tämä sarja on säilytettävä valolta suojassa ja -20 ℃:ssa.Jos sitä käytetään usein, se voidaan säilyttää myös 4 ℃:ssa lyhyen aikaa (10 päivää).
Ei vahvistussignaaleja
1. Pakkauksessa oleva Taq DNA -polymeraasi menettää aktiivisuutensa pakkauksen väärän säilytyksen tai vanhenemisen vuoksi.
Suositus: Tarkista sarjan säilytysolosuhteet;lisää uudelleen sopiva määrä Taq DNA Polymerase PCR-järjestelmään tai osta uusi Real Time PCR Kit vastaavia kokeita varten.
2. DNA-templaatissa on paljon Taq DNA -polymeraasin estäjiä.
Ehdotus: Puhdista malli uudelleen tai vähennä käytetyn mallin määrää.
3.Mg2+-pitoisuus ei ole sopiva.
Suositus: Tarjoamamme 2× Real PCR -seoksen Mg2+-pitoisuus on 3,5 mM.Joidenkin erityisalukkeiden ja templaattien Mg2+-pitoisuus voi kuitenkin olla korkeampi.Siksi voit lisätä MgCl2:ta suoraan Mg2+-pitoisuuden optimoimiseksi.On suositeltavaa nostaa Mg2+ 0,5 mM joka kerta optimointia varten.
4. PCR-monistusolosuhteet eivät ole sopivia, ja alukesekvenssi tai pitoisuus on väärä.
Ehdotus: varmista alukesekvenssin oikeellisuus ja aluke ei ole hajonnut;jos vahvistussignaali ei ole hyvä, yritä alentaa hehkutuslämpötilaa ja säätää alukkeen konsentraatiota asianmukaisesti.
5. Mallin määrä on liian vähän tai liikaa.
Suositus: Suorita templaatin linearisointigradienttilaimennus ja valitse templaattikonsentraatio, jolla on paras PCR-vaikutus reaaliaikaiseen PCR-kokeeseen.
NTC:llä on liian korkea fluoresenssiarvo
1. Käytön aikana aiheutunut reagenssikontaminaatio.
Suositus: Korvaa uusilla reagensseilla reaaliaikaisia PCR-kokeita varten.
2. PCR-reaktiojärjestelmän valmistuksen aikana tapahtui kontaminaatiota.
Suositus: Suorita tarpeelliset suojatoimenpiteet käytön aikana, kuten: käytä lateksikäsineitä, käytä pipetin kärkeä suodattimella jne.
3. Alukkeet hajoavat, ja alukkeiden hajoaminen aiheuttaa epäspesifistä monistumista.
Ehdotus: Käytä SDS-PAGE-elektroforeesia havaitaksesi, ovatko alukkeet hajonneet, ja korvaa ne uusilla alukkeilla reaaliaikaisia PCR-kokeita varten.
Alukedimeeri tai epäspesifinen monistus
1.Mg2+-pitoisuus ei ole sopiva.
Suositus: Toimittamamme 2× Real PCR EasyTM Mixin Mg2+-pitoisuus on 3,5 mM.Joidenkin erityisalukkeiden ja templaattien Mg2+-pitoisuus voi kuitenkin olla korkeampi.Siksi voit lisätä MgCl2:ta suoraan Mg2+-pitoisuuden optimoimiseksi.On suositeltavaa nostaa Mg2+ 0,5 mM joka kerta optimointia varten.
2.PCR-pariutuslämpötila on liian alhainen.
Ehdotus: Nosta PCR-pariutuslämpötilaa 1 ℃ tai 2 ℃ joka kerta.
3.PCR-tuote on liian pitkä.
Suositus: Reaaliaikaisen PCR-tuotteen pituuden tulisi olla 100-150 bp, enintään 500 bp.
4. Alukkeet hajoavat, ja alukkeiden hajoaminen johtaa spesifisen monistumisen ilmaantumiseen.
Ehdotus: Käytä SDS-PAGE-elektroforeesia havaitaksesi, ovatko alukkeet hajonneet, ja korvaa ne uusilla alukkeilla reaaliaikaisia PCR-kokeita varten.
5.PCR-järjestelmä on väärä tai järjestelmä on liian pieni.
Ehdotus: PCR-reaktiojärjestelmä on liian pieni, mikä saa havaitsemistarkkuuden heikkenemään.On parasta käyttää kvantitatiivisen PCR-laitteen suosittelemaa reaktiojärjestelmää reaaliaikaisen PCR-kokeen suorittamiseen uudelleen.
Kvantitatiivisten arvojen huono toistettavuus
1. Laite on viallinen.
Ehdotus: Laitteen jokaisen PCR-reiän välillä voi olla virheitä, mikä voi johtaa huonoon toistettavuuteen lämpötilan hallinnan tai havaitsemisen aikana.Tarkista vastaavan laitteen ohjeiden mukaan.
2. Näytteen puhtaus ei ole hyvä.
Suositus: Epäpuhtaat näytteet johtavat kokeen huonoon toistettavuuteen, joka sisältää templaatin ja alukkeiden puhtauden.Templaatti on parasta puhdistaa uudelleen, ja alukkeet puhdistetaan parhaiten SDS-PAGE:lla.
3.PCR-järjestelmän valmistelu- ja säilytysaika on liian pitkä.
Ehdotus: Käytä reaaliaikaista PCR-järjestelmää PCR-kokeeseen heti valmistuksen jälkeen, äläkä jätä sitä sivuun liian pitkäksi aikaa.
4. PCR-monistusolosuhteet eivät ole sopivia, ja alukesekvenssi tai pitoisuus on väärä.
Ehdotus: varmista alukesekvenssin oikeellisuus ja aluke ei ole hajonnut;jos vahvistussignaali ei ole hyvä, yritä alentaa hehkutuslämpötilaa ja säätää alukkeen konsentraatiota asianmukaisesti.
5.PCR-järjestelmä on väärä tai järjestelmä on liian pieni.
Ehdotus: PCR-reaktiojärjestelmä on liian pieni, mikä saa havaitsemistarkkuuden heikkenemään.On parasta käyttää kvantitatiivisen PCR-laitteen suosittelemaa reaktiojärjestelmää reaaliaikaisen PCR-kokeen suorittamiseen uudelleen.