Ohjeita ongelmien analysointiin

The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。

RNA:ta ei voida uuttaa tai nukleiinihapon saanto on alhainen

Talteenottotehokkuuteen vaikuttavat yleensä monet tekijät, kuten: näytteen RNA-pitoisuus, toimintatapa, eluointitilavuus jne.

Yleisten syiden analyysi:

1.Jäähaude tai matalan lämpötilan (4 °C) sentrifugointi käytön aikana.

Suositus: Toiminta huonelämpötilassa (15-25 °C), ei koskaan jäähaudetta ja matalalämpötilainen sentrifugi.

2. Väärä näytteiden säilytys tai liian pitkä näytteen säilytys.

Suositus: Säilytä näytteet -80 °C:ssa tai jäädytä nestetypessä ja vältä toistuvaa pakastusta ja sulatusta;yritä käyttää juuri kerättyjä näytteitä RNA:n uuttamiseen.

3. Riittämätön näytteen hajoaminen

Suositus: Varmista, että näyte ja työliuos (lineaarinen akryyliamidi) on sekoitettu huolellisesti ja inkuboitu 10 minuuttia huoneenlämmössä (15-25 °C).

4. Eluentti lisättiin väärin

Suositus: Varmista, että RNase-Free ddH2O on lisätty puhdistuskolonnin kalvon keskelle

5. Väärä tilavuus vedetöntä etanolia puskurissa viRW2

Suositus: Noudata ohjeita, lisää oikea määrä vedetöntä etanolia Buffer viRW2:een ja sekoita ne hyvin ennen sarjan käyttöä.

6.Väärä näytteen käyttö.

Suositus: 200 µl näytettä per 500 µl puskuria viRL.Liiallinen näytetilavuus vähentää RNA:n uuttonopeutta.

7.Väärä eluutiotilavuus tai epätäydellinen eluointi.

Suositus: Puhdistuskolonnin eluenttitilavuus on 30-50 μl;jos eluointiteho ei ole tyydyttävä, on suositeltavaa lisätä esilämmitettyä RNaasi-Free ddH:ta₂O ja pidennä huoneenlämpötilaan asettamisen aikaa, esim. 5-10 min

8. Puhdistuskolonnissa on etanolijäännös puskurissa viRW2 huuhtelun jälkeen.

Suositus: Jos etanolia on vielä jäljellä puskurissa viRW2 huuhtelun ja 2 minuutin tyhjän putken sentrifugoinnin jälkeen, puhdistuspylväs voidaan jättää huoneenlämpötilaan 5 minuutiksi tyhjässä putkessa sentrifugoinnin jälkeen jäljellä olevan etanolin poistamiseksi kokonaan.

Puhdistettujen RNA-molekyylien hajoaminen

Puhdistetun RNA:n laatu liittyy tekijöihin, kuten näytteen varastointiin, RNaasikontaminaatioon ja toimintaan.

Yleisten syiden analyysi:

1. Kerättyjä näytteitä ei tallennettu ajoissa.

Suositus: Jos näytettä ei käytetä ajoissa keräämisen jälkeen, säilytä se välittömästi -80 ℃:ssa tai nestetypessä.Yritä käyttää RNA-molekyylien uuttamiseen juuri kerättyjä näytteitä aina kun mahdollista.

2. Kerätyt näytteet jäädytettiin ja sulatettiin toistuvasti.

Suositus: Vältä toistuvaa pakastusta ja sulattamista (enintään kerran) näytteenoton ja varastoinnin aikana, muuten nukleiinihapon saanto vähenee.

3. RNase tuotiin leikkaussaliin tai kertakäyttökäsineitä, naamioita jne. ei käytetty.

Ehdotus: RNA-molekyylien uuttokoe suoritetaan parhaiten erillisessä RNA-leikkaussalissa ja koepöytä puhdistetaan ennen koetta.Käytä kertakäyttökäsineitä ja naamioita kokeen aikana välttääksesi RNAasin aiheuttaman RNA:n hajoamisen.

4. Reagenssi on kontaminoitunut RNaasilla käytön aikana.

Ehdotus: Korvaa uudella virus-RNA:n eristyspakkauksella vastaavia kokeita varten.

5.Sentrifugiputkien, pipetin kärkien jne. RNaasi-kontaminaatio. Ehdotus: Varmista, että sentrifugiputket, pipetin kärjet ja pipetit ovat kaikki RNaasivapaita.

Puhdistetut RNA-molekyylit vaikuttivat alavirran kokeisiin

Puhdistuskolonnissa puhdistetut RNA-molekyylit vaikuttavat alavirran kokeisiin, jos suola-ioneja tai proteiineja on liikaa, kuten: käänteistranskriptio, Northern blot jne.

1. Eluoiduissa RNA-molekyyleissä on jäljellä suola-ioneja.

Suositus: Varmista, että Puffer viRW2:een on lisätty oikea määrä vedetöntä etanolia, ja pese puhdistuskolonni kahdesti käyttöohjeen oikean sentrifugointinopeuden mukaisesti；Jos suola-ioneja on vielä jäljellä, voit lisätä puhdistuskolonniin Buffer viRW2:ta ja jättää sen huoneenlämpöön 5 minuutiksi.Suorita sitten sentrifugointi suola-ionien kontaminaatioiden poistamiseksi suurimmassa määrin

2. Eluoiduissa RNA-molekyyleissä on jäljellä etanolia

Suositus: Kun olet varmistanut, että puhdistuskolonnit on huuhdeltu Buffer viRW2:lla, suorita sentrifugointi tyhjässä putkessa käyttöohjeessa olevan keskipakonopeuden mukaisesti.Jos etanolia on vielä jäljellä, se voidaan jättää 5 minuutiksi huoneenlämpötilaan tyhjässä putkessa suoritetun sentrifugoinnin jälkeen jäljellä olevan etanolin poistamiseksi suurimmassa määrin.

Käyttöohjeet:

Viral RNA Isolation Kit -ohjekirja