Escherichia coli O157:H7 Nukleiinihapon havaitsemispakkaus (PCR-fluoresoiva koetinmenetelmä)
Sarjan kuvaus:
Cat.No.FP102
Sitä käytetään E. coli O157:H7:n nopeaan havaitsemiseen ja seulomiseen elintarvikkeista, rehuista, vesinäytteistä ja ympäristönäytteistä.
Kuvaukset
Sitä käytetään E. coli O157:H7:n nopeaan havaitsemiseen ja seulomiseen elintarvikkeista, rehuista, vesinäytteistä ja ympäristönäytteistä.
[Testausperiaate]Fluoresoivan PCR-tekniikan periaatteen mukaisesti spesifiset alukkeet ja Taqman-koettimet on suunniteltu Escherichia coli O157: H7:n spesifiselle geenille ja havaitaan fluoresoivalla PCR-laitteella Escherichia coli O157: H7:n DNA:n kvalitatiivisen havaitsemisen toteuttamiseksi.
Sarjan sisältö
Huomautus: ROX-kanavaanturi ei sisälly toimitukseen.
| Ckomponentteja | Erittely | Qmäärä |
| Puskuri A | Putki | 1 |
| Puskuri B | Putki | 1 |
| Positiivinen ohjaus | Putki | 1 |
| Negatiivinen kontrolli | Putki | 1 |
Odotettu käyttö
Sitä käytetään E. coli O157:H7:n nopea havaitseminen ja seulonta elintarvikkeissa, rehuissa, vesinäytteissä ja ympäristönäytteissä.
Säilytysolosuhteet ja viimeinen voimassaolopäivä
Säilytä -20 ℃ pimeässä ja vältä toistuvaa jäätymistä ja sulattamista.
Voimassaoloaika on 12kuukautta, ja valmistuspäivämäärä näkyy ulkopakkauksessa.
Välineet ja kulutustarvikkeet
Fluoresoiva kvantitatiivinen PCR-instrumentti, pipettipistooli ja sovituskärjet, vortex-ravistin, minisentrifugi.
Käyttö
1. Näytteen käsittely
1.1 Näytetyyppi: Tämä sarja sopii elintarvike-, rehu-, vesinäytteille ja muille näytteille, joiden epäillään olevan Escherichia coli O157:H7:n saastuttamia.Syväkäsitellyt lihatuotteet, juomat ja muut pigmenttejä sisältävät aineet on huuhdeltava, jotta ne eivät vaikuta fluoresenssisignaalien keräämiseen.
1.2 Näytteen käsittely: Katso "GB 4789.10-2016 Elintarviketurvallisuuden kansallinen standardi elintarvikemikrobiologinen Escherichia coli O157:n mikrobiologinen tutkimus: H7-testi" näytteen valmistelusta, rikastusviljelystä ja Escherichia coli O157: H7:n eristämisestä.
- Nukleiinihapon uuttaminen
Ota 20 ml rikastusliuosta 1,5 ml:n sentrifugiputkeen, lisää 200 µl mikrobilysaattia (tarvitaan lisäpakkaus), vorteksoi 30 sekuntia, sentrifugoi lyhyesti ja aseta sivuun.
Huomautuksia: Nukleiinihapon uuttaminen lysaatista on saatettava päätökseen 10 minuutin kuluessa, eikä sitä voida säilyttää pitkään.
3. Nukleiinihappojen monistus
3.1 Kytke fluoresoiva kvantitatiivinen PCR-laite päälle käyttöä varten.
Puskuri A ja puskuri B sarjasta, sulata ne perusteellisesti ja sentrifugoi lyhyesti.Lisää 18 µl puskuria A ja 2 µl puskuria B kuhunkin PCR-reaktioputkeen.Lisää sitten 5 ml kutakin negatiivista kontrollia, uutettua nukleiinihappoa ja positiivista kontrollia PCR-reaktioputkiin, sulje putket ja sentrifugoi lyhyesti.
3.3 Siirrä PCR-reaktioputki fluoresoivaan PCR-laitteeseen ja suorita monistuskokeita seuraavien menetelmien avulla: valitse 25 ml reaktiojärjestelmää varten, kerää fluoresenssisignaalit 60 °C:ssa jokaista sykliä kohti ja valitse FAM tunnistuskanavaksi.
| Vaihe | Ohjelmoida | Jaksojen lukumäärä |
| 1 | 37℃ 5 min | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 min | 1 |
| 3 | 95°C 15s | 4 0 |
| 60℃ 30s (kerää fluoresenssi) |
Ohjeita ongelmien analysointiin
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
RNA:ta ei voida uuttaa tai nukleiinihapon saanto on alhainen
Talteenottotehokkuuteen vaikuttavat yleensä monet tekijät, kuten: näytteen RNA-pitoisuus, toimintatapa, eluointitilavuus jne.
Yleisten syiden analyysi:
1.Jäähaude tai matalan lämpötilan (4 °C) sentrifugointi käytön aikana.
Suositus: Toiminta huonelämpötilassa (15-25 °C), ei koskaan jäähaudetta ja matalalämpötilainen sentrifugi.
2. Väärä näytteiden säilytys tai liian pitkä näytteen säilytys.
Suositus: Säilytä näytteet -80 °C:ssa tai jäädytä nestetypessä ja vältä toistuvaa pakastusta ja sulatusta;yritä käyttää juuri kerättyjä näytteitä RNA:n uuttamiseen.
3. Riittämätön näytteen hajoaminen
Suositus: Varmista, että näyte ja työliuos (lineaarinen akryyliamidi) on sekoitettu huolellisesti ja inkuboitu 10 minuuttia huoneenlämmössä (15-25 °C).
4. Eluentti lisättiin väärin
Suositus: Varmista, että RNase-Free ddH2O on lisätty puhdistuskolonnin kalvon keskelle
5. Väärä tilavuus vedetöntä etanolia puskurissa viRW2
Suositus: Noudata ohjeita, lisää oikea määrä vedetöntä etanolia Buffer viRW2:een ja sekoita ne hyvin ennen sarjan käyttöä.
6.Väärä näytteen käyttö.
Suositus: 200 µl näytettä per 500 µl puskuria viRL.Liiallinen näytetilavuus vähentää RNA:n uuttonopeutta.
7.Väärä eluutiotilavuus tai epätäydellinen eluointi.
Suositus: Puhdistuskolonnin eluenttitilavuus on 30-50 μl;jos eluointiteho ei ole tyydyttävä, on suositeltavaa lisätä esilämmitettyä RNaasi-Free ddH:ta2O ja pidennä huoneenlämpötilaan asettamisen aikaa, esim. 5-10 min
8. Puhdistuskolonnissa on etanolijäännös puskurissa viRW2 huuhtelun jälkeen.
Suositus: Jos etanolia on vielä jäljellä puskurissa viRW2 huuhtelun ja 2 minuutin tyhjän putken sentrifugoinnin jälkeen, puhdistuspylväs voidaan jättää huoneenlämpötilaan 5 minuutiksi tyhjässä putkessa sentrifugoinnin jälkeen jäljellä olevan etanolin poistamiseksi kokonaan.
Puhdistettujen RNA-molekyylien hajoaminen
Puhdistetun RNA:n laatu liittyy tekijöihin, kuten näytteen varastointiin, RNaasikontaminaatioon ja toimintaan.
Yleisten syiden analyysi:
1. Kerättyjä näytteitä ei tallennettu ajoissa.
Suositus: Jos näytettä ei käytetä ajoissa keräämisen jälkeen, säilytä se välittömästi -80 ℃:ssa tai nestetypessä.Yritä käyttää RNA-molekyylien uuttamiseen juuri kerättyjä näytteitä aina kun mahdollista.
2. Kerätyt näytteet jäädytettiin ja sulatettiin toistuvasti.
Suositus: Vältä toistuvaa pakastusta ja sulattamista (enintään kerran) näytteenoton ja varastoinnin aikana, muuten nukleiinihapon saanto vähenee.
3. RNase tuotiin leikkaussaliin tai kertakäyttökäsineitä, naamioita jne. ei käytetty.
Ehdotus: RNA-molekyylien uuttokoe suoritetaan parhaiten erillisessä RNA-leikkaussalissa ja koepöytä puhdistetaan ennen koetta.Käytä kertakäyttökäsineitä ja naamioita kokeen aikana välttääksesi RNAasin aiheuttaman RNA:n hajoamisen.
4. Reagenssi on kontaminoitunut RNaasilla käytön aikana.
Ehdotus: Korvaa uudella virus-RNA:n eristyspakkauksella vastaavia kokeita varten.
5.Sentrifugiputkien, pipetin kärkien jne. RNaasi-kontaminaatio. Ehdotus: Varmista, että sentrifugiputket, pipetin kärjet ja pipetit ovat kaikki RNaasivapaita.
Puhdistetut RNA-molekyylit vaikuttivat alavirran kokeisiin
Puhdistuskolonnissa puhdistetut RNA-molekyylit vaikuttavat alavirran kokeisiin, jos suola-ioneja tai proteiineja on liikaa, kuten: käänteistranskriptio, Northern blot jne.
1. Eluoiduissa RNA-molekyyleissä on jäljellä suola-ioneja.
Suositus: Varmista, että Puffer viRW2:een on lisätty oikea määrä vedetöntä etanolia, ja pese puhdistuskolonni kahdesti käyttöohjeen oikean sentrifugointinopeuden mukaisesti；Jos suola-ioneja on vielä jäljellä, voit lisätä puhdistuskolonniin Buffer viRW2:ta ja jättää sen huoneenlämpöön 5 minuutiksi.Suorita sitten sentrifugointi suola-ionien kontaminaatioiden poistamiseksi suurimmassa määrin
2. Eluoiduissa RNA-molekyyleissä on jäljellä etanolia
Suositus: Kun olet varmistanut, että puhdistuskolonnit on huuhdeltu Buffer viRW2:lla, suorita sentrifugointi tyhjässä putkessa käyttöohjeessa olevan keskipakonopeuden mukaisesti.Jos etanolia on vielä jäljellä, se voidaan jättää 5 minuutiksi huoneenlämpötilaan tyhjässä putkessa suoritetun sentrifugoinnin jälkeen jäljellä olevan etanolin poistamiseksi suurimmassa määrin.
Käyttöohjeet:
Viral RNA Isolation Kit -ohjekirja
