Ongelma-analyysiopas

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Alhainen saanto tai ei DNA:ta

Genomisen DNA:n saantoon vaikuttavat yleensä monet tekijät, mukaan lukien näytteen lähde, näytteen ikä, näytteen säilytysolosuhteet ja toiminta.

Genomista DNA:ta ei voitu saada uuttamisen aikana

1. Kudosnäytteitä on säilytetty väärin tai niitä on säilytetty liian kauan, mikä johtaa genomisen DNA:n hajoamiseen.

Suositus: Säilytä kudosnäytteitä nestetypessä tai -20 °C:ssa°C;yritä käyttää juuri kerättyjä näytteitä genomisen DNA:n erottamiseen.

2. Liian pieni näytemäärä saattaa estää vastaavan genomisen DNA:n uuttamisen.

Suositus: Pitkään säilytetyille kudosnäytteille, joissa on vakava genominen DNA:n hajoaminen, kudosnäytteiden määrää voidaan lisätä tarkoituksenmukaisesti huomattavan genomisen DNA:n erottamiseksi.Näytteen määrä voidaan määrittää DNA-tarpeen mukaan, mutta tuore näyte ei saa ylittää 100 mg ja kuiva näyte enintään 30 mg.

3. Näytettä ei ole jauhettu nestetypellä tai asetettu liian pitkäksi aikaa nestetypen jälkeen.

Ehdotus: DNA-uuton aikana näyte on jauhettava kokonaan nestetypellä soluseinän rikkomiseksi;jauhamisen jälkeen siirrä näytejauhe PL1:een, joka on esilämmitetty 65 asteeseen°C mahdollisimman pian (kun jauhettu jauhe on sulanut, genominen DNA alkaa hajota nopeasti) .

4. Foregene Protease -valmisteen väärä varastointi johtaa alentuneeseen tai inaktivoituun aktiivisuuteen.

Suositus: Vahvista Foregene Protease -valmisteen säilytysolosuhteet tai vaihda se uuteen Foregene Proteaasiin entsymaattista hydrolyysiä varten.

5. Sarjaa on säilytetty väärin tai sitä on säilytetty liian kauan, mikä aiheuttaa joidenkin sarjan osien vioittumisen.

Suositus: Osta uusi kasvin genomisen DNA:n erotuspakkaus asiaan liittyviin toimintoihin.

6. Sarjan väärä käyttö.

Ehdotus: Osta kasvi-DNA:n eristyspakkaus, joka on tarkoitettu näytteille kasvin genomisen DNA:n uuttamista ja puhdistamista varten.

7. Puskuroi WB lisäämättä avedetön etanoli.

Suositus: Varmista, että lisäät oikean määrän absoluuttista etanolia WB-puskuriin.

8. Eluenttia ei tiputettu piidioksidikalvolle oikein.

Ehdotus: Lisää esilämmitetty eluentti 65 °C:seen℃pisaroittain silikageelikalvon keskelle ja jätä se huoneenlämpötilaan 5 minuutiksi eluointitehokkuuden lisäämiseksi.

Uuttaminen alhaisen tuoton genomisen DNA:n saamiseksi

1. Näytettä on säilytetty väärin tai sitä on säilytetty liian kauan, mikä johtaa genomisen DNA:n hajoamiseen.

Suositus: Säilytä kudosnäytteitä -20:ssa℃;yritä käyttää juuri kerättyjä kudosnäytteitä genomisen DNA:n erottamiseen.

2. Jos kudosnäytteiden määrä on liian pieni, erotettu genominen DNA on pienempi.

Suositus: Jotkut kasvinäytteet sisältävät runsaasti vettä, kuten vesikasvit, kuten levät jne., annostusta voidaan lisätä sopivasti tai vedestä voidaan kuivata hieman ennen leikkausta.

3. Näytteitä ei jauhettu perusteellisesti nestetypellä tai ne jätettiin huoneenlämpöön liian pitkäksi ajaksi jauhamisen jälkeen.

Suositus: Nestemäisen typen jauhatuksen tulee olla riittävä ja näytteen soluseinä tulee rikkoa niin paljon kuin mahdollista;heti jauhamisen jälkeen näytejauhe tulee siirtää 65:een℃esilämmitetty puskuri PL1 seuraavaa vaihetta varten.

4. Et käytä oikeaa sarjaa.

Suositus: Käytä erityistä Plant DNA Isolation Kit -sarjaa kasvien genomisen DNA:n uuttamiseen ja puhdistamiseen.

5. Foregene Protease -valmisteen väärä varastointi johtaa alentuneeseen tai inaktivoituun aktiivisuuteen.

Suositus: Vahvista Foregene Protease -valmisteen säilytysolosuhteet tai vaihda se uuteen Foregene Proteaasiin entsymaattista hydrolyysiä varten.

6. Eluenttiongelma

Suositus: Käytä eluointiin Buffer EB:tä;jos käytät ddH:ta₂O tai muut eluentit, varmista, että eluentin pH on välillä 7,0-8,5.

7. Eluentti ei ole tippunut oikein

Suositus: Lisää eluointitippa silikakalvon keskelle ja jätä se huoneenlämpötilaan 5 minuutiksi eluointitehokkuuden lisäämiseksi.

8. Eluentin tilavuus on liian pieni

Suositus: Käytä genomisen DNA:n eluenttia ohjeiden mukaisesti, vähintään 100μl.

Uutettu genominen DNA alhaisella puhtaudella

Genomisen DNA:n alhainen puhtaus johtaa alavirran kokeiden epäonnistumiseen tai huonoon vaikutukseen, kuten: entsyymiä ei voida leikata eikä kohdegeenifragmenttia saada PCR:llä.

1. Sekalainen proteiinikontaminaatio, RNA-kontaminaatio.

Analyysi: Puskuria PW ei käytetty kolonnin pesemiseen;Puskuria PW ei käytetty kolonnin pesemiseen oikealla sentrifugointinopeudella.

Ehdotus: yritä varmistaa, että supernatantissa ei ole saostumista, kun supernatantti johdetaan kolonnin läpi;muista pestä puhdistuskolonni Buffer PW:llä ohjeiden mukaisesti, eikä tätä vaihetta voi jättää väliin.

2. Epäpuhtausionien saastuminen.

Analyysi: Buffer WB -pesukolonni jätettiin pois tai pestiin vain kerran, mikä johti jäännösioniseen kontaminaatioon.

Suositus: Muista pestä kahdesti Buffer WB:llä ohjeiden mukaisesti poistaaksesi jäännösionit mahdollisimman paljon.

3. RNaasikontaminaatio.

Analyysi: Eksogeeninen RNaasi lisätään puskuriin;väärä pesutoiminto puskurissa PW johtaa jäännös-RNaasiin ja vaikuttaa alavirran RNA:n kokeellisiin toimiin, kuten in vitro -transkriptioon.

Ehdotus: Foregene-sarjan nukleiinihappouuttopakkaukset voivat poistaa RNA:ta ilman ylimääräistä RNaasia, eivätkä kaikki Plant DNA Isolation Kitin reagenssit tarvitse RNaasia;muista pestä puhdistuskolonni Buffer PW:llä ohjeiden mukaisesti, eikä tätä vaihetta voi jättää väliin.

4. Etanolijäämät.

Analyysi: Sen jälkeen kun puhdistuspylväs oli pesty puskurilla WB, tyhjää putkea ei sentrifugoitu.

Suositus: Noudata ohjeita oikeasta tyhjän putken sentrifugoinnista.

Käyttöopas:

Plant DNA Isolation Kit -käyttöopas