Alhainen A260/A230-suhde johtuu yleensä epäpuhtauksista, joiden suurin absorptioaallonpituus on 230 nm.Katsotaanpa, mitä nämä epäpuhtaudet sisältävät:

• Yleiset epäpuhtaudet	Absorption aallonpituus	Suhdevaikutus
  Proteiini	~230nm ja 280nm	Samanaikainen A:n vähentäminen260/A 280ja A260/A 280suhteet
  Guanidiini suola	220-240 nm	Pienennä A260/A 280suhde
  Fenoli	~270nm	-
  Trizol	~230nm ja 270nm	Pienennä A260/A 280suhde
  EDTA	~230nm	Pienennä A260/A 280suhde
  Etanoli	230-240 nm	Pienennä A260/A 280suhde

 
 
 
Yleisten epäpuhtauksien absorption aallonpituus ja kontrastiarvo

Proteiinikontaminaatio
Proteiinin saastumista voidaan pitää yleisimpänä saasteena nukleiinihappojen uuttoprosessissa.Proteiinia on ylemmän ja alemman vesifaasin välissäLuomuvaihe.Saastuminen vähentää suhdetta A260/A280 ja A260/A230 samaan aikaan, ja suhde A260/A230 muuttuu selvemmin kuin suhde A260/A280.
Seuraavan aikanakäänteinen transkriptioor qPCR-reaktiot, proteiinijäämät voivat estää tai häiritä entsyymin toimintaa.Paras tapa välttää proteiinikontaminaatio on pitää mielessä periaate "mielummin vähemmän kuin enemmän, pieni määrä monta kertaa" supernatanttia imettäessä.

2. Guanidiinin saastuminen
hydrokloridilla (GuHCl) ja guanidiinitiosyanaatilla (GTC) on denaturoiva vaikutus proteiineja, jotka voivat nopeasti tuhota solukalvot nukleiinihappouuttoprosessin aikana aiheuttaen proteiinien denaturoitumista ja saostumista.GuHCl:n ja GTC:n absorptioaallonpituus on välillä 220-240 nm, jajäännösguanidiniumsuolaa vähentää A260/A230-suhdetta.Vaikka jäännösguanidiniumsuolaa pienentää suhdetta,vaikutus loppupään kokeisiin on itse asiassa mitätön.

3. Trizol-kontaminaatio
Trizolin pääkomponentti on fenoli.Fenolin päätehtävä on hajottaa soluja ja vapauttaa soluissa proteiineja ja nukleiinihappoaineita.Vaikka fenoli voi tehokkaasti denaturoida proteiineja, se ei voi täysin estää RNaasi-aktiivisuutta.Siksi 8-hydroksikinoliinia, guanidiini-isotiosyanaattia, β-merkaptoetanolia jne. lisätään TRIzoliin endogeenisen ja eksogeenisen RNaasin estämiseksi.
Uuttaessaan solujen RNA:ta Trizol voi nopeasti hajottaa solut ja estää soluista vapautuvaa nukleaasia, ja jäljelle jäänyt Trizol vähentää merkittävästi A260/A230-suhdetta.
Käsittelymenetelmä: Sentrifugoitaessa on huomioitava, että Trizolissa oleva fenoli liukenee helposti vesifaasiin 4°:n ja huoneenlämpötilassa.

4. Etanolin jäännös
Etanolia käytetään viimeisessä prosessissa DNA:n saostamiseen samalla, kun se liuottaa suola-ioneja, jotka voivat olla sitoutuneita DNA:han.Korkeimman absorptioaallonpituusabsorptiohuippuetanoli on myös 230-240 nm:ssä, mikävähentää myös A260/A230-suhdetta.
Menetelmä etanolijäämien välttämiseksi voidaan toistaa kahdesti lopullisen eluoinnin aikana puhaltamalla sisäänvetokaappikaksi minuuttia, jotta etanoli haihtuu täysin ennen puskurin lisäämistä eluointia varten.
On kuitenkin tiedettävä, että suhde on vain RNA-laadun arviointiindeksi.Jos edellä mainitut toiminnot ovat tiukasti säänneltyjä, poikkeamalla suhteen ja standardialueen välillä ei ole suurta vaikutusta loppupään kokeisiin.
Liittyvät tuotteet:
Animal Total RNA Isolation Kit
Plant Total RNA Isolation Kit
Solujen kokonais-RNA:n eristyspakkaus
Plant Total RNA Isolation Kit Plus