Foreasy Taq DNA -polymeraasi
Kuvaus
Foreasy Taq DNA Polymerase on uusi Taq-entsyymi, joka ekspressoituu Escherichia coli -muokkausbakteereissa geenirekombinaatioteknologialla.Itse entsyymillä on tietty kuumakäynnistysaktiivisuus, ja sitä voidaan käyttää tavanomaiseen PCR:ään ja qPCR:ään;sillä on 5'→3'-DNA-polymeraasiaktiivisuutta ja 5'→3'-eksonukleaasiaktiivisuutta, mutta ei 3'→5'-eksonukleaasiaktiivisuutta.
Sarjan komponentit
Komponentti | IM-01011 | IM-01012 | IM-01013 |
Foreasy Taq DNA -polymeraasi(5 U/μl) | 5000 U (1 ml) | 50 KU (10 ml) | 500 KU (100 ml) |
2× Taq-reaktiopuskuri | 25 ml × 5 | 250 ml × 5 | 500 ml × 25 |
Ominaisuudet ja edut
- Korkea spesifisyys: Entsyymillä on tietty kuumakäynnistysaktiivisuus.
- Nopea vahvistus: 10 s/kb.
- Erittäin mukautuva templaatti: voidaan käyttää tehokkaasti monistaa GC High arvo, erilaisia vaikeasti monistettavia DNA-templaatteja.
- Vahva tarkkuus: tavallinen Taq Enzyme 6 kertaa.
- Vahva lämmönkestävyys: Voidaan sijoittaa 37 °C:seen viikoksi ja ylläpitää yli 90 % aktiivisuutta
Kit-sovellus
Erilaisia PCR/qPCR-järjestelmiä ja suoria PCR-järjestelmiä
DNA-fragmenttien PCR-monistus
DNA-leimaus
DNA-sekvensointi
PCR A-häntäinen
U Määritelmä
1U: Entsyymimäärä, joka tarvitaan sisällyttämään 10 nmol deoksinukleotideja happoon liukenemattomaan aineeseen käyttämällä aktivoitua lohen siittiöiden DNA:ta templaattina/alukkeena 30 minuutin ajan 74 °C:ssa.
Reaktiotila
Lämpötila | Aika | Kierrä |
37 °C | 5 minuuttia | 1 |
94 °C | 5 minuuttia | 1 |
94 °C | 10 sekuntia | 35 |
60 °C | 10 sekuntia | |
72 °C | 20 s/kb | |
72 °C | 2 minuuttia | 1 |
Varastointi
-20 ± 5 °C 2 vuoden ajan tai -80 °C pitkäaikaista varastointia varten.
Ei vahvistussignaaleja
1. Pakkauksessa oleva Taq DNA -polymeraasi menettää aktiivisuutensa pakkauksen väärän säilytyksen tai vanhenemisen vuoksi.
Suositus: Tarkista sarjan säilytysolosuhteet;lisää uudelleen sopiva määrä Taq DNA Polymerase PCR-järjestelmään tai osta uusi Real Time PCR Kit vastaavia kokeita varten.
2. DNA-templaatissa on paljon Taq DNA -polymeraasin estäjiä.
Ehdotus: Puhdista malli uudelleen tai vähennä käytetyn mallin määrää.
3.Mg2+-pitoisuus ei ole sopiva.
Suositus: Tarjoamamme 2× Real PCR -seoksen Mg2+-pitoisuus on 3,5 mM.Joidenkin erityisalukkeiden ja templaattien Mg2+-pitoisuus voi kuitenkin olla korkeampi.Siksi voit lisätä MgCl2:ta suoraan Mg2+-pitoisuuden optimoimiseksi.On suositeltavaa nostaa Mg2+ 0,5 mM joka kerta optimointia varten.
4. PCR-monistusolosuhteet eivät ole sopivia, ja alukesekvenssi tai pitoisuus on väärä.
Ehdotus: varmista alukesekvenssin oikeellisuus ja aluke ei ole hajonnut;jos vahvistussignaali ei ole hyvä, yritä alentaa hehkutuslämpötilaa ja säätää alukkeen konsentraatiota asianmukaisesti.
5. Mallin määrä on liian vähän tai liikaa.
Suositus: Suorita templaatin linearisointigradienttilaimennus ja valitse templaattikonsentraatio, jolla on paras PCR-vaikutus reaaliaikaiseen PCR-kokeeseen.
NTC:llä on liian korkea fluoresenssiarvo
1. Käytön aikana aiheutunut reagenssikontaminaatio.
Suositus: Korvaa uusilla reagensseilla reaaliaikaisia PCR-kokeita varten.
2. PCR-reaktiojärjestelmän valmistuksen aikana tapahtui kontaminaatiota.
Suositus: Suorita tarpeelliset suojatoimenpiteet käytön aikana, kuten: käytä lateksikäsineitä, käytä pipetin kärkeä suodattimella jne.
3. Alukkeet hajoavat, ja alukkeiden hajoaminen aiheuttaa epäspesifistä monistumista.
Ehdotus: Käytä SDS-PAGE-elektroforeesia havaitaksesi, ovatko alukkeet hajonneet, ja korvaa ne uusilla alukkeilla reaaliaikaisia PCR-kokeita varten.
Alukedimeeri tai epäspesifinen monistus
1.Mg2+-pitoisuus ei ole sopiva.
Suositus: Toimittamamme 2× Real PCR EasyTM Mixin Mg2+-pitoisuus on 3,5 mM.Joidenkin erityisalukkeiden ja templaattien Mg2+-pitoisuus voi kuitenkin olla korkeampi.Siksi voit lisätä MgCl2:ta suoraan Mg2+-pitoisuuden optimoimiseksi.On suositeltavaa nostaa Mg2+ 0,5 mM joka kerta optimointia varten.
2.PCR-pariutuslämpötila on liian alhainen.
Ehdotus: Nosta PCR-pariutuslämpötilaa 1 ℃ tai 2 ℃ joka kerta.
3.PCR-tuote on liian pitkä.
Suositus: Reaaliaikaisen PCR-tuotteen pituuden tulisi olla 100-150 bp, enintään 500 bp.
4. Alukkeet hajoavat, ja alukkeiden hajoaminen johtaa spesifisen monistumisen ilmaantumiseen.
Ehdotus: Käytä SDS-PAGE-elektroforeesia havaitaksesi, ovatko alukkeet hajonneet, ja korvaa ne uusilla alukkeilla reaaliaikaisia PCR-kokeita varten.
5.PCR-järjestelmä on väärä tai järjestelmä on liian pieni.
Ehdotus: PCR-reaktiojärjestelmä on liian pieni, mikä saa havaitsemistarkkuuden heikkenemään.On parasta käyttää kvantitatiivisen PCR-laitteen suosittelemaa reaktiojärjestelmää reaaliaikaisen PCR-kokeen suorittamiseen uudelleen.
Kvantitatiivisten arvojen huono toistettavuus
1. Laite on viallinen.
Ehdotus: Laitteen jokaisen PCR-reiän välillä voi olla virheitä, mikä voi johtaa huonoon toistettavuuteen lämpötilan hallinnan tai havaitsemisen aikana.Tarkista vastaavan laitteen ohjeiden mukaan.
2. Näytteen puhtaus ei ole hyvä.
Suositus: Epäpuhtaat näytteet johtavat kokeen huonoon toistettavuuteen, joka sisältää templaatin ja alukkeiden puhtauden.Templaatti on parasta puhdistaa uudelleen, ja alukkeet puhdistetaan parhaiten SDS-PAGE:lla.
3.PCR-järjestelmän valmistelu- ja säilytysaika on liian pitkä.
Ehdotus: Käytä reaaliaikaista PCR-järjestelmää PCR-kokeeseen heti valmistuksen jälkeen, äläkä jätä sitä sivuun liian pitkäksi aikaa.
4. PCR-monistusolosuhteet eivät ole sopivia, ja alukesekvenssi tai pitoisuus on väärä.
Ehdotus: varmista alukesekvenssin oikeellisuus ja aluke ei ole hajonnut;jos vahvistussignaali ei ole hyvä, yritä alentaa hehkutuslämpötilaa ja säätää alukkeen konsentraatiota asianmukaisesti.
5.PCR-järjestelmä on väärä tai järjestelmä on liian pieni.
Ehdotus: PCR-reaktiojärjestelmä on liian pieni, mikä saa havaitsemistarkkuuden heikkenemään.On parasta käyttää kvantitatiivisen PCR-laitteen suosittelemaa reaktiojärjestelmää reaaliaikaisen PCR-kokeen suorittamiseen uudelleen.