Posken vanupuikko/FTA-kortti DNA:n eristyspakkaus Genominen DNA:n uutto- tai puhdistuspakkaus poskivanupuikoista
Sarjan kuvaus:
Puhdista nopeasti korkealaatuinen genominen DNA bukkaalista vanupuikko-/FTA-korttinäytteistä.
◮Ei RNaasi-kontaminaatiota:Pakkauksen mukana toimitettu DNA-pylväs mahdollistaa RNA:n poistamisen genomisesta DNA:sta lisäämättä RNaasi:a kokeen aikana, mikä estää laboratoriota kontaminoitumasta eksogeenisellä RNaasilla.
◮Nopea vauhti:Foregene Proteaasilla on suurempi aktiivisuus kuin vastaavilla proteaasilla, ja se pilkkoo kudosnäytteet nopeasti;toimenpide on yksinkertainen ja genomisen DNA:n erotus voidaan suorittaa 20-80 minuutissa.
◮Kätevä:Sentrifugointi suoritetaan huoneenlämpötilassa, eikä 4 °C:n matalalämpötilasentrifugointia tai DNA:n etanolisaostusta tarvita.
◮Turvallisuus:Orgaanista reagenssiuuttoa ei tarvita.
◮Korkealaatuinen:Uutetussa genomisessa DNA:ssa on suuria fragmentteja, ei RNA:ta, ei RNaasi ja erittäin alhainen ionipitoisuus, mikä voi täyttää erilaisten kokeiden vaatimukset.
◮Mikroeluointijärjestelmä:Se voi lisätä genomisen DNA:n pitoisuutta, mikä on kätevää alavirran havaitsemiseen tai kokeeseen.
Kuvaus
Tämä pakkaus tarjoaa tehokkaan ja nopean menetelmän korkean pitoisuuden genomisen DNA:n saamiseksi bukkaalista vanupuikoista ja FTA-kortista (veripisteet).Yrityksemme käyttäminen'Ainutlaatuinen vain DNA:ta sisältävä piidioksidikalvosentrifugointipylväs ja -koostumus yhdistettynä Foregene Proteaasiin, korkeapitoisuus, korkealaatuinen genominen DNA voidaan uuttaa 80 minuutissa.Erityisesti suunniteltu pieni puhdistuspylväs sitoo genomisen DNA:n ja DNA voidaan eluoida pienellä määrällä (15μl) eluutiojärjestelmä saadun genomisen DNA:n pitoisuuden lisäämiseksi, mikä on kätevä alavirran havaitsemiseen tai kokeeseen.Sarjalla voidaan käsitellä yhtä tai useampaa näytettä kerrallaan, eikä puhdistusprosessi edellytä orgaanisten aineiden, kuten fenolin, kloroformin uuttamista ja aikaa vievää isopropanoli- tai etanolisaostusta, ja toiminta on yksinkertainen ja aikaa säästävä.
Tekniset tiedot
50 Valmistelut
Sarjan komponentit
| Puskuri ST1 |
| Puskuri ST2 |
| Lineaarinen akryyliamidi |
| Puskuri PW |
| Puskuri WB |
| Puskuri EB |
| Foregene Proteaasi |
| Vain DNA:ta sisältävä sarake |
| Ohjeet |
Ominaisuudet ja edut
-Ei RNaasikontaminaatiota: Kitin mukana tuleva DNA-Only-kolonni mahdollistaa RNA:n poistamisen genomisesta DNA:sta lisäämättä RNaasia kokeen aikana, jolloin vältetään laboratorio kontaminoitumasta eksogeenisellä RNaasilla.
-Nopea nopeus: Foregene Proteaasilla on korkeampi aktiivisuus kuin vastaavilla proteaaseilla, se sulattaa näytteet nopeasti;yksinkertainen toiminta.
- Kätevä: Sentrifugointi suoritetaan huoneenlämpötilassa, eikä 4 °C:n matalalämpötilasentrifugointia tai DNA:n etanolisaostusta tarvita.
-Turvallisuus: Orgaanista reagenssiuuttoa ei tarvita.
-Korkea laatu: Uutetussa genomisessa DNA:ssa on suuria fragmentteja, ei RNA:ta, ei RNaasi ja äärimmäisen alhainen ionipitoisuus, mikä voi täyttää erilaisten kokeiden vaatimukset.
-Mikroeluointijärjestelmä: Se voi lisätä genomisen DNA:n pitoisuutta, mikä on kätevä alavirran havaitsemiseen tai kokeeseen.
Kit-sovellus
Se soveltuu genomisen DNA:n puhdistukseen seuraavista näytteistä: poskipuikko, FTA Card (veritahrat).
Varastointi ja säilyvyys
-Tätä pakkausta voidaan säilyttää 12 kuukautta kuivissa olosuhteissa huoneenlämmössä (15-25 °C);Jos sitä on säilytettävä pidempään, se voidaan säilyttää 2-8 °C:ssa.
Huomautus: Jos liuos säilytetään alhaisessa lämpötilassa, se on altis saostumiseen.Ennen käyttöä, muista asettaa liuos pakkaukseen huoneenlämmössä jonkin aikaa.Esilämmitä sitä tarvittaessa 37 °C:n vesihauteessa 10 minuuttia, jotta sakka liukenee, ja sekoita ennen käyttöä.
-Foregene Protease -liuoksella on ainutlaatuinen koostumus, joka on aktiivinen, kun sitä säilytetään huoneenlämmössä pitkään (3 kuukautta);sen aktiivisuus ja stabiilisuus paranevat 4°C:ssa säilytettynä, joten on suositeltavaa säilyttää 4°C:ssa, muistaa olla -20°C:ssa.
Puhdistuskolonni on tukossa
Tässä pakkauksessa genomisen DNA:n uuttooperaatiossa puhdistuspylväs adsorboidaan suoraan näytteen entsymaattiseen lyysiseokseen ilman sentrifugointivaihetta, ja puhdistuspylväs voi olla tukkeutunut epätäydellisen entsymoinnin ja näytteen korkean viskositeetin vuoksi.
Seuraavat mahdolliset syyt ovat seuraavat:
1. Kudosnäytteiden epätäydellinen entsymaattinen pilkkominen.
Suositus: Foregene Protease -näytteen käsittelyaikaa voidaan pidentää sopivasti tai supernatantti voidaan ottaa sentrifugoinnin jälkeen 12 000 rpm (~13 400 × g) 5 minuutin ajan.
2. Kudosnäytteiden tai suurten kudosten liiallinen käyttö.
Suositus: On parasta, että näytteessä ei ylitetä 1 bukkaalista vanupuikkoa;jos näyte on liian suuri, lisää puskurin ST1, Foregene Protease ja puskurin ST2 annosta vastaavasti.
3. Näytteen viskositeetti on liian korkea.
Suositus: Näytteet voidaan asianmukaisesti laimentaa 10 mM Tris-HCl:lla ennen genomisen DNA:n uuttamista.
4. Verikortin palaset on imetty.
Suositus: Veripisteen (FTA Card) genomiuuton vaiheen 6 ohimenevää sentrifugointiaikaa voidaan pidentää sopivasti.
Alhainen saanto tai ei DNA:ta
Usein on monia tekijöitä, jotka vaikuttavat genomisen DNA:n saantoon, mukaan lukien näytteen alkuperä, näytteen säilytysolosuhteet, näytteen valmistus, käsittely jne.
Genomista DNA:ta ei voida saada uuttamisen aikana
Mahdolliset syyt ovat seuraavat:
1. Näytteiden väärä säilytys tai liian pitkä varastointi johtaa genomisen DNA:n hajoamiseen.
Suositus: Pyyhkäisynäytteistä tulee mieluiten ottaa tuoreita näytteitä, eikä ole suositeltavaa käyttää säilöttyjä vanupuikkoja genomisen DNA:n erotusoperaatioissa.veripistenäytteiden tulee varmistaa, että laatu on laadukasta, eikä varastointiaika saa olla liian pitkä.
2. Liian vähäinen kudoksen käyttö saattaa johtaa siihen, että vastaava genominen DNA ei poistu.
Suositus: Noudata käyttöoppaan bukkaalisen vanupuikkonäytteenottoohjeita ja pyyhi niin monta kertaa kuin mahdollista, jotta suupuikkoon voidaan kiinnittää riittävästi soluja genomisen DNA:n erottamista varten;veripistenäytteen ottoa varten veripisteen leikkausaluetta voidaan lisätä sopivasti.
3. Foregene Protease on säilynyt väärin, mikä johtaa sen aktiivisuuden vähenemiseen tai inaktivoitumiseen.
Suositus: Vahvista Foregene Proteaasin säilytysolosuhteet tai vaihda se uuteen Foregene Proteaasiin entsymaattista reaktiota varten.
4. Sarjan väärä säilytys tai säilytysaika on liian pitkä, mikä johtaa joidenkin sarjan osien vikaantumiseen.
Suositus: Osta uusi buccaalivanupuikko-DNA-eristyspakkaus vastaavia toimenpiteitä varten.
5. Puskuri WB ei lisää absoluuttista etanolia.
Suositus: Varmista, että puskuri WB lisää oikean määrän absoluuttista etanolia.
6. Eluenttia ei ole lisätty oikein silikonikalvoon.
Suositus: Lisää 65 °C esilämmitettyjä eluenttipisaroita silikonikalvon keskelle ja anna olla huoneenlämpötilassa 5 minuuttia eluointitehokkuuden lisäämiseksi.
Pienituottoinen genominen DNA eristetty
Seuraavat mahdolliset syyt ovat seuraavat:
1. Näytteiden väärä säilytys tai liian pitkä varastointi johtaa genomisen DNA:n hajoamiseen.
Suositus: Vanupuikkonäytteet otetaan mieluiten vasta, eikä säilöttyjä vanupuikkoja tule käyttää genomisen DNA:n erottamiseen.
2. Jos kudosnäytteen määrä on liian pieni, erotetun genomisen DNA:n pitoisuus on pienempi.
Suositus: Noudata käyttöohjeessa olevia vanupuikkonäytteenottoohjeita ja pyyhi niin monta kertaa kuin mahdollista, jotta vanupuikkoon voidaan kiinnittää riittävästi soluja genomisen DNA:n erottamista varten.
3. Foregene Protease on säilynyt väärin, mikä johtaa sen aktiivisuuden vähenemiseen tai inaktivoitumiseen.
Suositus: Vahvista Foregene Proteaasin säilytysolosuhteet tai vaihda se uuteen Foregene Proteaasiin entsymaattista reaktiota varten.
4. Eluenttiongelmat.
Suositus: Käytä eluointiin Buffer EB:tä;jos käytät ddH:ta2O tai muut eluentit varmista, että eluaatin pH on välillä 7,0-8,5.
5. Eluaattia ei ole lisätty oikein tipoittain.
Suositus: Lisää eluenttipisaroita silikonikalvon keskelle ja anna olla huoneenlämmössä 5 minuuttia eluointitehokkuuden lisäämiseksi.
6. Eluutionestettä kerääntyy liian vähän.
Suositus: Käytä genomisen DNA:n eluointiin ohjeen mukaista eluenttia, vähintään 15 μl.
Eristetyn genomisen DNA:n alhainen puhtaus
Alhainen genomisen DNA:n puhtaus voi johtaa alavirran kokeiden epäonnistumiseen tai epätyydyttäviin tuloksiin, kuten: entsyymejä ei voida leikata auki, PCR ei saa kiinnostavaa geenifragmenttia jne.
Mahdolliset syyt ovat seuraavat:
1. Heteroproteiinisaaste, RNA-saaste.
Analyysi: Puhdistuskolonnia ei pesty käyttämällä puskuria PW;puskurin PW-pesupuhdistuskolonnia ei pesty käyttämällä oikeaa keskipakonopeutta.
Suositus: Varmista, että supernatantissa ei ole saostumista ennen etanolin lisäämistä;muista pestä puhdistuskolonni ohjeiden mukaisesti, eikä tätä vaihetta voi jättää väliin.
2. Epäpuhtausionien saastuminen.
Analyysi: Puskurin WB pesupuhdistuspylväs jätettiin pois tai pestiin vain kerran, mikä johti jäännösioniseen kontaminaatioon.
Suositus: Muista pestä Buffer WB 2 kertaa ohjeiden mukaisesti poistaaksesi jäännösionit mahdollisimman paljon.
3. RNA-entsyymikontaminaatio.
Analyysi: Vieraita RNaaseja lisättiin puskuriin;Puskurin PW-pesutoiminta oli virheellinen, mikä johti RNaasi-tähteisiin, jotka vaikuttivat alavirran RNA:n kokeellisiin toimintoihin, kuten in vitro -transkriptioon.
Suositus: Foregene-sarjan nukleiinihapon eristyspakkaukset voivat poistaa RNA:ta ilman ylimääräistä RNaasi-lisäystä, joten bukkaalinen Swab/FTA Card DNA Isolation Kit -sarjan ei tarvitse lisätä RNaasia;muista noudattaa Buffer PW -pesupuhdistuskolonnin ohjeita, eikä tätä vaihetta voi jättää väliin.
4. Etanolijäännös.
Analyysi: Puskuri WB ei suorittanut tyhjän putken sentrifugointia puhdistuskolonnin pesun jälkeen.
Suositus: Suorita oikea tyhjän putken sentrifugointi ohjeiden mukaisesti.
5. Muut epäpuhtaudet.
Analyysi: Tallennettuja näytteitä tai erikoisnäytteitä ei esikäsitetä.
Suositus: Esikäsittele näyte perusteellisesti ohjeiden mukaisesti.
