FAQ on tarkoitettuAnimal Total RNA Isolation Kit

Seuraava analyysi ongelmista, joissa saatat kohdataeläinkudos/solu-RNA:n uuttaminen will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNA:ta ei uuteta tai RNA:n saannot ovat alhaiset

Usein on useita eri tekijöitä, jotka vaikuttavat talteenottotehokkuuteen, kuten: kudosnäytteen RNA-pitoisuus, toimintatapa, eluointitilavuus jne.

1. Jäähaude tai kryogeeninen (4 °C) sentrifugointi suoritettiin käytön aikana.

Suositus: Käytä huoneenlämmössä (15-25 °C) koko prosessin ajan, älä jäähaudetta ja sentrifugoi matalissa lämpötiloissa.

2. Väärä näytteen säilytys tai liian pitkä näytteen säilytysaika.

Suositus: Säilytä näytteet -80 °C:ssa tai jäädytä nestetypessä ja vältä toistuvaa jäädytys-sulatuskäyttöä;yritä käyttää tuoretta kudosta tai viljeltyjä soluja RNA:n uuttamiseen.

3. Riittämätön näytteen hajoaminen.

Suositus: Kun homogenisoi kudosta, varmista, että kudos on riittävän homogenisoitunut ja että kudossolut ovat jakautuneet riittävästi selittääkseen RNA:n vapautumisen.

4. Eluenttia ei ole lisätty oikein.

Suositus: Varmista, että RNase-Free ddH₂O:ta lisätään tipoittain puhdistuskolonnin kalvon keskelle.

5. Oikeaa määrää absoluuttista etanolia ei lisätty puskuriin RL2 tai puskuri RW2.

Suositus: Noudata ohjeita, lisää oikea määrä absoluuttista etanolia puskuriin RL2 ja puskuri RW2 ja sekoita hyvin ennen sarjan käyttöä.

6. Kudosnäytteen annostus ei ole sopiva.

Suositus: Käytä 10-20 mg kudosta tai (1-5) × 10⁶soluja 500 μl:aa RL1-puskuria kohden, koska liiallinen kudosten käyttö voi heikentää RNA:n uuttamista.

7. Virheellinen eluointitilavuus tai epätäydellinen eluointi.

Suositus: Puhdistuskolonnin eluointitilavuus on 50-200 μl;jos eluutiovaikutus ei ole tyydyttävä, on suositeltavaa pidentää huoneenlämpöistä sijoitusaikaa esilämmitetyn RNase-Free ddH:n lisäämisen jälkeen₂O, esim. 5-10 min.

8. Puhdistuspylväässä on etanolijäännöstä puskurin RW2 pesun jälkeen.

Suositus: Jos puskurin RW2 pesun, 1 minuutin tyhjän putken sentrifugoinnin jälkeen jää etanolia, tyhjän putken sentrifugoinnin aikaa voidaan pidentää 2 minuuttiin tai puhdistuskolonni voidaan asettaa huoneenlämpötilaan 5 minuutiksi etanolin jäännösten poistamiseksi riittävästi.

Puhdistettu RNA hajoaa

Puhdistetun RNA:n laatu liittyy tekijöihin, kuten näytteen säilymiseen, RNaasikontaminaatioon ja manipulointiin jne.

1. Kudosnäytteitä ei säilytetä ajoissa.

Suositus: Jos kudosnäytteitä tai soluja ei käytetä ajoissa keräämisen jälkeen, kylmäsäilytä välittömästi -80 °C:ssa tai nestetypessä.Käytä RNA:n erottamiseen vasta otettua kudos- tai solunäytettä aina kun mahdollista.

2. Kudosnäytteiden toistuva jäädytys-sulatus.

Suositus: Kudosnäytteitä säilytettäessä on parasta leikata ne pieniksi paloiksi säilytystä varten ja poistaa yksi palasista käytön aikana, jotta vältetään näytteen toistuva jäädytys-sulatus ja RNA:n hajoaminen.

3. RNase on lisätty tai se ei käytä kertakäyttökäsineitä, naamioita jne. toimenpiteen aikana.

Suositus: RNA-uuttokokeet tehdään parhaiten erillisissä RNA-käsittelyhuoneissa ja pöytä tyhjennetään ennen koetta.

Käytä kertakäyttökäsineitä ja naamioita kokeen aikana minimoimaan RNAasin aiheuttaman RNA:n hajoamisen.

4. Reagenssit kontaminoituvat RNaasilla käytön aikana.

Suositus: Korvaa uudella Animal Total RNA Isolation Kit -sarjalla vastaavia kokeita varten.

5. RNA:n käsittelyssä käytetyt sentrifugiputket, kärjet jne. ovat kontaminoituneet RNaasilla.

Suositus: Varmista, että RNA:n erottamisessa käytetyt sentrifugiputket, kärjet, pipetit jne. ovat kaikki RNaasivapaita.

Puhdistettu saatu RNA vaikuttaa alavirran kokeisiin

Puhdistuspylväällä puhdistettu RNA, jos suola-ionit, proteiinipitoisuus on liian suuri, vaikuttaa alavirran kokeeseen, kuten: käänteinen transkriptio, Northern Blot et ai.

1. Eluoidussa RNA:ssa on suolaionijäämiä.

Suositus: Varmista, että puskuriin RW2 on lisätty oikea määrä etanolia, ja suorita 2 puhdistuspylvään pesua käyttöön ilmoitetulla keskipakonopeudella;Jos suola-ionijäämiä on, jätä puhdistuspylväs puskuriin RW2 5 minuutiksi huoneenlämpötilaan ja suorita sentrifugointi suolakontaminaation poistamisen maksimoimiseksi.

2. Etanolijäännös eluoidussa RNA:ssa.

Suositus: Varmista, että puskurin RW2 pesun jälkeen suorita tyhjän putken sentrifugointi toiminnolle ilmoitetulla sentrifugointinopeudella, pidennä tyhjän putken sentrifugoinnin aikaa 2 minuuttiin, jos etanolia on vielä jäljellä, tai jätä se huoneenlämpöön 5 minuutiksi tyhjän putken sentrifugoinnin jälkeen maksimoidaksesi etanolijäämien poistumisen.

Nulseiinihapponäytetyyppien eristäminen

Foregenen RNA-eristyspakkaukset voivat saada täydellisen RNA:n eristämisen/uuton seuraavista näytelähteistä: eläinkudos, kasvi, solut, virus, veri jne.

Kuinka säilytän sarjan

Huoneenlämmössä säilytys 24 kuukautta.