Vasta-aineet, joita kutsutaan myös immunoglobuliineiksi (Ig), ovat glykoproteiineja, jotka sitoutuvat spesifisesti antigeeneihin.
 
Perinteinen vasta-ainevalmiste valmistetaan immunisoimalla eläimiä ja keräämällä antiseerumia.Siksi antiseerumi sisältää yleensä vasta-aineita muita ei-sukuisia antigeenejä ja muita seerumin proteiinikomponentteja vastaan.Yleiset antigeenimolekyylit sisältävät enimmäkseen useita erilaisia ​​epitooppeja, joten tavanomaiset vasta-aineet ovat myös sekoitus vasta-aineita useita erilaisia ​​epitooppeja vastaan.Jopa tavanomaiset seerumivasta-aineet, jotka on suunnattu samaa epitooppia vastaan, koostuvat edelleen heterogeenisistä vasta-aineista, joita eri B-solukloonit tuottavat.Sen vuoksi tavanomaisia ​​seerumivasta-aineita kutsutaan myös polyklonaalisiksi vasta-aineiksi tai lyhyesti polyklonaalisiksi vasta-aineiksi.
 
Monoklonaalinen vasta-aine (monoklonaalinen vasta-aine) on yhden B-solukloonin tuottama erittäin yhtenäinen vasta-aine, joka on suunnattu vain tiettyä epitooppia vastaan.Se valmistetaan yleensä hybridoomateknologialla – hybridoomavasta-aineteknologia perustuu solufuusioteknologiaan, jossa B-solut yhdistetään kykyyn erittää spesifisiä vasta-aineita ja myeloomasoluja, joilla on rajaton kasvukapasiteetti, B-soluhybridoomiksi.Tällä hybridoomasolulla on emosolun ominaisuuksia.Se voi lisääntyä loputtomasti ja kuolemattomasti in vitro kuten myeloomasolut, ja se voi syntetisoida ja erittää spesifisiä vasta-aineita, kuten pernan lymfosyyttejä.Kloonauksen avulla voidaan saada yhdestä hybridoomasolusta peräisin oleva monoklonaalinen linja, toisin sanoen hybridoomasolulinja.Sen tuottamat vasta-aineet ovat erittäin homogeenisia vasta-aineita samaa antigeenideterminanttia vastaan, toisin sanoen monoklonaalisia vasta-aineita.
 
Vasta-aineet esiintyvät yhtenä tai useampana Y-muotoisena monomeerinä (eli monoklonaalisina vasta-aineina tai polyklonaalisina vasta-aineina).Jokainen Y-muotoinen monomeeri koostuu 4 polypeptidiketjusta, mukaan lukien kaksi identtistä raskasketjua ja kaksi identtistä kevyttä ketjua.Kevytketju ja raskas ketju on nimetty niiden molekyylipainon mukaan.Y-muotoisen rakenteen yläosa on vaihteleva alue, joka on antigeenin sitoutumiskohta.(Ote Detai Bio-Monoclonal Antibody Conceptista)
 
Vasta-aineen rakenne
Raskas ketju
Nisäkkään Ig-raskasketjuja on viisi tyyppiä, jotka on nimetty kreikkalaisilla kirjaimilla α, δ, ε, γ ja μ.Vastaavia vasta-aineita kutsutaan IgA:ksi, IgD:ksi, IgE:ksi, IgG:ksi ja IgM:ksi.Eri raskaat ketjut eroavat kooltaan ja koostumukseltaan.α ja γ sisältävät noin 450 aminohappoa, kun taas μ ja ε sisältävät noin 550 aminohappoa.
Jokaisella raskaalla ketjulla on kaksi aluetta: vakioalue ja vaihteleva alue.Kaikilla samantyyppisillä vasta-aineilla on sama vakioalue, mutta erityyppisten vasta-aineiden välillä on eroja.Raskaiden ketjujen y, α ja 8 vakioalueet koostuvat kolmesta Ig-domeenista peräkkäin, ja sarana-alue lisää sen joustavuutta;raskasketjujen μ ja ε vakioalueet koostuvat 4 Ig-domeenista.Eri B-solujen tuottaman vasta-aineen raskaan ketjun vaihteleva alue on erilainen, mutta saman B-solun tai solukloonin tuottaman vasta-aineen variaabeli alue on sama ja kunkin raskaan ketjun vaihteleva alue on noin 110 aminohappoa pitkä., Ja muodostavat yhden Ig-alueen.
 
Kevyt ketju
Nisäkkäissä on vain kahdenlaisia ​​kevyitä ketjuja: lambda-tyyppiä ja kappa-tyyppiä.Jokaisessa kevyessä ketjussa on kaksi kytkettyä domeenia: vakioalue ja vaihteleva alue.Kevytketjun pituus on noin 211-217 aminohappoa.Jokaisen vasta-aineen sisältämät kaksi kevyttä ketjua ovat aina samat.Nisäkkäillä kunkin vasta-aineen kevytketjulla on vain yksi tyyppi: kappa tai lambda.Joissakin alemmissa selkärankaisissa, kuten rustokaloissa (rustokaloissa) ja luukaloissa, löytyy myös muun tyyppisiä kevytketjuja, kuten iota (iota) -tyyppiä.
 
Fab- ja Fc-segmentit
Fc-segmentti voidaan yhdistää suoraan entsyymien tai fluoresoivien väriaineiden kanssa vasta-aineiden leimaamiseksi.Se on osa, jossa vasta-aine niittautuu levyyn ELISA-prosessin aikana, ja se on myös osa, jossa toinen vasta-aine tunnistetaan ja sitoutuu immunosaostuksessa, immunoblottauksessa ja immunohistokemiassa.Vasta-aineet voidaan hydrolysoida kahdeksi F(ab)-segmentiksi ja yhdeksi Fc-segmentiksi proteolyyttisillä entsyymeillä, kuten papaiinilla, tai ne voidaan katkaista sarana-alueelta pepsiinillä ja hydrolysoida yhdeksi F(ab)2-segmentiksi ja yhdeksi Fc-segmentiksi.IgG-vasta-ainefragmentit ovat joskus erittäin hyödyllisiä.Fc-segmentin puuttumisen vuoksi F(ab)-segmentti ei saostu antigeenin mukana, eivätkä immuunisolut sieppaa sitä in vivo -tutkimuksissa.Pienten molekyylifragmenttien ja silloitustoiminnon puutteen vuoksi (Fc-segmentin puuttumisen vuoksi) Fab-segmenttiä käytetään yleensä radioleimaukseen toiminnallisissa tutkimuksissa, ja Fc-segmenttiä käytetään pääasiassa estoaineena histokemiallisessa värjäyksessä.
 
Vaihtelevat ja vakioalueet
Vaihteleva alue (V-alue) sijaitsee 1/5 tai 1/4 (sisältää noin 118 aminohappotähdettä) H-ketjusta lähellä N-päätä ja 1/2 (sisältää noin 108-111 aminohappotähdettä) lähellä L-ketjun N-päätä.Jokaisella V-alueella on peptidirengas, jonka muodostavat ketjun sisäiset disulfidisidokset, ja jokainen peptidirengas sisältää noin 67 - 75 aminohappotähdettä.Aminohappojen koostumus ja järjestys V-alueella määräävät vasta-aineen antigeenisitoutumisspesifisyyden.Johtuen jatkuvasti muuttuvista aminohappotyypeistä ja -sekvenssistä V-alueella, voidaan muodostaa monenlaisia ​​vasta-aineita, joilla on erilaiset sitoutumisantigeenispesifisyydet.L-ketjun ja H-ketjun V-alueita kutsutaan vastaavasti VL:ksi ja VH:ksi.VL:ssä ja VH:ssa joidenkin paikallisten alueiden aminohappokoostumuksessa ja sekvenssissä on suurempi vaihteluaste.Näitä alueita kutsutaan hypervariaabeliksi alueiksi (HVR).Aminohappokoostumus ja ei-HVR-osien järjestely V-alueella on suhteellisen konservatiivinen, jota kutsutaan runkoalueeksi.VL:ssä on kolme hypervariaabelia aluetta, jotka sijaitsevat tavallisesti aminohappotähteissä 24-34 ja vastaavasti 89-97.VL:n ja VH:n kolmea HVR:ää kutsutaan vastaavasti HVR1:ksi, HVR2:ksi ja HVR3:ksi.Röntgendiffraktion tutkimus ja analyysi osoitti, että hypervariaabeli alue on todellakin paikka, johon vasta-aineantigeeni sitoutuu, joten sitä kutsutaan komplementaarisuutta määrittäväksi alueeksi (CDR).VL:n ja VH:n HVR1, HVR2 ja HVR3 voidaan kutsua vastaavasti CDR1, CDR2 ja CDR3.Yleensä CDR3:lla on korkeampi hypervariabiliteetti.Hypervariaabeli alue on myös pääpaikka, jossa Ig-molekyylien idiotyyppiset determinantit ovat olemassa.Useimmissa tapauksissa H-ketjulla on tärkeämpi rooli sitoutumisessa antigeeniin.
Vakioalue (C-alue)sijaitsee 3/4:ssä tai 4/5:ssä (noin aminohaposta 119 C-päähän) H-ketjusta lähellä C-päätä ja 1/2 (sisältää noin 105 aminohappotähdettä) lähellä L-ketjun C-päätä.Jokainen H-ketjun toiminnallinen alue sisältää noin 110 aminohappotähdettä ja sisältää peptidirenkaan, joka koostuu 50-60 aminohappotähteestä, jotka on yhdistetty disulfidisidoksilla.Tämän alueen aminohappokoostumus ja järjestely ovat suhteellisen vakioita samassa eläimen Ig-isotyypin L-ketjussa ja saman tyypin H-ketjussa.Sama, se voi sitoutua vain spesifisesti vastaavaan antigeeniin, mutta sen C-alueen rakenne on sama, eli sillä on sama antigeenisyys.Hevosen anti-ihmisen IgG-sekundaarinen vasta-aine (tai anti-vasta-aine) voidaan yhdistää näiden kahden kanssa. Esiintyy vasta-aineiden (IgG) yhdistelmä erilaisia ​​eksotoksiineja vastaan.Tämä on tärkeä perusta sekundaaristen vasta-aineiden valmistuksessa ja fluoreseiinin, isotooppien, entsyymien ja muiden leimattujen vasta-aineiden käyttämisessä.
 
 
Liittyvät tuotteet:
Cell Direct RT-qPCR -sarja