PCR-menetelmät ja nukleiinihappoaerosolikontaminaatio nukleiinihappotestauslaboratorioissa ovat kuin kolikon kaksi puolta.Voimme vain valita, saammeko sen vai emme, mutta emme voi valita, haluammeko sen vai kulutamme sen.

1. DNA-poistoaineen seulonta

Nukleiinihappoaerosolikontaminaation avaruudellisen poistamisen saavuttamiseksi on ensin tarpeen seuloa DNA:n poistoaineet, jotka voivat poistaa nukleiinihappoja nestemäisessä tilassa.Koska ei ole monia DNA-poistoaineita, jotka todella toimivat.Katso kokeellinen menetelmä: DNA-poistaja ei voi olla laboratorion "salainen nurkka"!

Tässä kokeessa 100 kopiota/μl (CT noin 31) ASFV-plasmidia ja DNA-poistajaa, jotka oli kvantifioitu digitaalisella PCR:llä, sekoitettiin yhtä suurissa tilavuuksissa, ja sitten annettiin reagoida huoneenlämmössä 10 minuuttia, 20 minuuttia ja 30 minuuttia.Nukleiinihappouuton jälkeen suoritettiin qPCR-monistus.Positiivista kontrollia, joka oli sekoitettu plasmidin ja veden kanssa, verrattiin.Koska koetta ei saatu päätökseen samaan aikaan, tulosten välillä voi olla tietty poikkeama, mutta se ei vaikuta kokeen lopputulokseen.Tähän mennessä olen arvioinut 10 kaupallista DNA-poistotuotetta.Vain tuotteet nro 1, nro 6 ja nro 8 voivat hajottaa tehokkaasti plasmidi-DNA:ta nestemäisessä tilassa.Muilla tuotteilla ei ole juuri mitään vaikutusta.

Taulukko 1 Kaupallisesti saatavan DNA-poistoaineen nukleiinihappopoistovaikutus

2. Yleisesti käytettyjen desinfiointiaineiden DNA-poistovaikutuskoe

1. Yleisesti käytettyjen desinfiointiaineiden seulonta

Laboratorioissa käytetään yleisesti monenlaisia ​​desinfiointiaineita: aldehydit, fenolit, alkoholit, kvaternaariset ammoniumsuolat, peroksidit, kloorivalmisteet sekä hapot ja emäkset.Näiden desinfiointiaineiden desinfiointivaikutukset mikro-organismeihin on täysin todistettu kokein, mutta nukleiinihappojen hajoamisvaikutuksista ei ole riittävästi kokeellista tietoa.Nukleiinihappojen testauslaboratoriot tarvitsevat desinfiointiaineen, jolla ei ole vain hyvä desinfioiva vaikutus mikro-organismeihin, vaan joka voi myös hajottaa DNA:ta.Testitulokset osoittavat, että vain kaksi kloorivalmistetta 84 desinfiointiaineesta ja triklooriisosyanuurihaposta ja 1 M suolahaposta täyttää vaatimukset.Koska 1 M suolahappo on erittäin syövyttävää, on suositeltavaa käyttää kloorivalmisteita nukleiinihappojen testauslaboratorioiden jätteiden hävittämiseen.Kloorivalmisteet syövyttävät kuitenkin metalleja, eikä niitä voida käyttää instrumenttien ja laitteiden desinfiointiin.

Taulukko 2 Erilaisten desinfiointiaineiden DNA-poistovaikutukset

2. Kloorivalmisteiden pienin tehokas pitoisuus

Klooripohjaisilla desinfiointiaineilla on voimakas DNA:ta hajottava vaikutus, mutta metallisyövyttävyyden ja -ärsytyksen vuoksi niitä voidaan käyttää lattian, ei-metallisten työtasojen, liotuskärkien, sentrifugiputkien ja muiden testiesineiden puhdistamiseen.

"Uuden koronaarikeuhkokuumeepidemian desinfioinnin teknisten ohjeiden" mukaan: Saastuttavat aineet (potilaiden veri, eritteet ja oksennus) saatavilla klooria 5g/l-10g/l klooripitoista desinfiointiainetta;lattiat, seinät ja esinepinnat käyttävät saatavilla olevaa klooria 1g/l Klooridesinfiointiainetta: vaatteet, vuodevaatteet ja muut tekstiilit liotetaan ensin klooridesinfiointiaineessa 0,5g/l saatavilla olevalla kloorilla 30 minuuttia ja puhdistetaan sitten tavalliseen tapaan.

Taulukko 3 DNA:n poistovaikutus eri kloori-desinfiointiainepitoisuuksilla

Testitulokset osoittavat, että: kun tehokas klooripitoisuus on suurempi tai yhtä suuri kuin 1,2 g/l, klooria sisältävä desinfiointiaine voi hajottaa täysin 100 kopiota/μL plasmidia, kun sitä käytetään 5 minuuttia.Toimiessaan 10 minuuttia 84 desinfiointiaine, jonka tehokas klooripitoisuus on suurempi tai yhtä suuri kuin 0,6 g/l, voi hajottaa täysin 100 kopiota/μl plasmideja.

3. Nukleiinihappoaerosolin saastuttaman ilmanpoistokoe

Kuinka puhdistaa nukleiinihappoaerosolien saastuttama ilma?Suurin osa ajatuksista on luoda aerosolilla saastuttama ympäristö ja sitten puhdistaa se tai puhdistaa nukleiinihapot saastumisen jälkeen.Minulle koe, jota ei voida toistaa ja kokeen tuloksia ei voida kvantitatiivisesti analysoida, on merkityksetön, joten lainasin joitakin desinfiointimenetelmiä ilman desinfiointiin.Katso "GB27948-2020 Yleiset vaatimukset ilman desinfiointiaineille" ja "Desinfioinnin tekniset tiedot"

1. Testimateriaalit

1.1 DNA:n poistoaine: Tässä kokeessa valittiin kaksi kaupallisesti saatavilla olevaa DNA-poistajaa 6 ja 8 taulukosta 1.

1.2 Testiplasmidi: Ottaen huomioon, että useimpien laboratoriosaasteiden CT-arvo on suurempi kuin 30, tällä kertaa käytetyn ASFV-geeniplasmidin pitoisuus on noin 100 kopiota/μL ja fluoresoiva kvantitatiivinen PCR CT on noin 31.07.Lisää plasmidi flocking pumpulipuikkuun ja ilmakuivaa.

1.3 Testauslaite: Bilingkehan KVBOX -desinfiointilaite, jota Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd. tukee ystävällisesti, on erinomainen ilman desinfiointikyky vetyperoksidi-desinfiointiaineella, ja se voi tappaa tehokkaasti itiöitä ja muita mikro-organismeja.

1.4 Testitila: suljettu noin 0,1 kuutiometrin siirtoikkuna.

2. Testausmenetelmä

Desinfiointikoneeseen asetettu desinfiointiaineen määrä on 10 ml ja pitoisuus 100 ml/m3, mikä on paljon suurempi kuin "GB27948-2020 Yleiset vaatimukset ilman desinfiointiaineille": aerosolisuihkedesinfiointia käytettäessä desinfiointiaineen määrän tulee olla ≤10 ml/m3