Äskettäin löysin jotain ihmeellistä!Monet hänen ympärillään olevat kokeneet kokeiden ammattilaiset eivät tiedä edes joitain kokeellisen perustietopisteitä.

Voitko vastata esimerkiksi seuraaviin kysymyksiin?

Onko OD260:n ja A260:n välillä eroa?Mitä kukin tarkoittaa?
OD on lyhenne sanoista optinen tiheys (optinen tiheys), A on absorbanssin (absorbanssin) lyhenne, nämä kaksi käsitettä ovat itse asiassa samat, "optinen tiheys" on "absorbanssi", mutta "optinen tiheys" on useimpien kansallisten standardien mukainen ja standardoitu.

Yleensä mittaamme OD-arvon aallonpituudella 260 nm laskeaksemme nukleiinihappopitoisuuden, joten mitä 1OD edustaa?
Nukleiinihapolla on maksimiabsorptiohuippu aallonpituudella 260 nm, joka sisältää sekä DNA:ta että RNA:ta sekä fragmentoituneita nukleiinihappofragmentteja (tämä on avainkohta).
Aallonpituudella 260 nm mitattu OD-arvo kirjattiin OD260:ksi.Jos näyte on puhdas, OD260-arvo voi laskea nukleiinihapponäytteen pitoisuuden.
1 OD260 = 50 μg/ml dsDNA (kaksijuosteinen DNA)
=37 μg/ml ssDNA (yksijuosteinen DNA)
= 40 ug/ml RNA:ta
= 30 μg/ml dNTP:t (oligonukleotidit)
Onko RT-PCR:n, Realtime-PCR:n ja QPCR:n välillä yhteyttä ja eroa?
RT-PCR on lyhenne sanoista Reverse Transcription PCR
Real Time PCR = qPCR, lyhenne sanoista Quantitative Real Time PCR
Vaikka Real Time PCR (reaaliaikainen fluoresoiva kvantitatiivinen PCR) ja Reverse Transcription PCR (käänteistranskriptio-PCR) näyttävät olevan molemmat lyhennetty RT-PCR:ksi.Mutta kansainvälinen sopimus on: RT-PCR viittaa erityisesti käänteistranskription PCR:ään.

Mitkä ovat yleisesti käytetyt nt, bp ja kb kuvaamaan DNA/RNA:n pituutta biologiassa?
nt = nukleotidi
bp = emäspari kantapari
kb = kilokanta

Tietenkin voisi sanoa, että monet ihmiset eivät välitä näistä pienistä yksityiskohdista!Kaikki tekevät tätä, eikä kukaan kysy sinulta mitä se on.Tiedätkö, että tämä on tarpeetonta, eikö?

Ei, ei, ei, tämä on erittäin tärkeää tietää!minkä takia?
Koska haluat julkaista artikkelin!Veli!Olitpa tavoitteena valmistua tai tieteellisen tutkimuksen saavutuksia, sinun täytyy luottaa artikkeleihin puhuaksesi!

Nukleiinihapon uuttamisen tulisi olla yksinkertaisin ja yksinkertaisin koe.Nukleiinihapon uuton laatu määrää suoraan myöhempien kokeiden tulokset.

Vaikka olen sanonut sen monta kertaa, on silti monia ystäviä, jotka eivät välitä.Tällä kertaa päätin siirtyä pois artikkelista!

Vähimmäistiedot kvantitatiivisten reaaliaikaisten PCR-kokeiden julkaisemista varten, joita kutsutaan nimellä MIQE, on kansainvälisesti lanseerattu joukko fluoresenssikvantitatiivisia kokeita koskevia ohjeita, joissa ehdotetaan vähimmäisstandardeja fluoresenssikvantitatiivisten PCR-kokeiden arvioinnissa ja artikkeleiden julkaisemisessa tarvittaville kokeellisille tiedoille.Kokeen suorittajan tarjoamien koeolosuhteiden ja analyysimenetelmien avulla arvioijat voivat paremmin arvioida tutkijan kokeellisen suunnitelman validiteettia.

Voidaan nähdä, että nukleiinihappouutto-osiossa on ehdotettu seuraavia havaitsemiskohteita:

"E" tarkoittaa tietoja, jotka on annettava, ja "D" tarkoittaa tietoja, jotka on annettava tarvittaessa.

Muoto on hyvin monimutkainen, itse asiassa haluan sanoa, että kaikkien on aloitettava

puhtaus (D), saanto (D), eheys (E) ja konsistenssi (E) nukleiinihappojen arvioimiseksi näissä neljässä näkökohdassa.

Kokeilutottumusten mukaan puhu ensin puhtauden ja keskittymisen arviointimenetelmistä.

OD-mittaus on kokeilijoiden suosikki ja helpoin havaitsemismenetelmä.Mitä tulee periaatteeseen, en mene tässä yksityiskohtiin.Monet laboratoriot käyttävät nyt ultramikrospektrofotometrejä nukleiinihapponäytteiden suoraan kvantitatiiviseen analysointiin.Kun ohjelma näyttää absorbanssiarvon, se näyttää suoraan pitoisuusarvon (nukleiinihappo, proteiini ja fluoresoiva väriaine) ja niihin liittyvät suhteet.Mitä tulee OD-arvon analyysiin, tallenna tämä kuva, niin olet kunnossa.

Universaali OD-arvoratkaisuluettelo

On kuitenkin muutamia varoituksia, jotka on tuotava esiin erikseen.

(Loppujen lopuksi tiedän, että sinun on oltava niitä, jotka säästävät ja odottavat, kunnes tarvitset niitä!)

Huomautus 1 Laitteet

Eri laitteet vaikuttavat OD-arvoon.Niin kauan kuin OD260 on tietyllä alueella, OD230- ja OD280-arvot ovat merkityksellisiä.Esimerkiksi tavallisen Eppendorf D30:n absorbanssialue aallonpituudella 260 nm on 0 ~ 3 A ja Thermon NanoDrop One on 260 nm:ssä.Absorbanssialue 0,5-62,5A.

Muistio 2Laimennusreagenssi

OD-arvoon voi vaikuttaa erilaisten reagenssien laimentaminen.Esimerkiksi puhdistetun RNA:n OD260/280-lukema pH:ssa7,5 10 mM Trispuskuri on välillä 1,9-2,1, kun taas sisäänneutraali vesiliuossuhde on pienempi, ehkä vain 1,8-2,0, mutta tämä ei tarkoita, että RNA:n laatu muuttuisi.

Huomautus 3Jäännösaineet

Jäännösaineiden olemassaolo vaikuttaa nukleiinihappopitoisuuden mittauksen tarkkuuteen, joten nukleiinihapponäytteissä on vältettävä proteiini-, fenoli-, polysakkaridi- ja polyfenolijäämiä mahdollisimman paljon.

Itse asiassa uuttaminen orgaanisilla reagensseilla on kuitenkin vanha menetelmä.Kaupallisissa sarjoissa uuttovaikutus voidaan saavuttaa piidioksidipohjaisella adsorptiokolonnilla yhdistettynä sentrifugointiin, jolloin vältetään myrkyllisiä ja haitallisia orgaanisia reagensseja, joita on vaikea poistaa jne. Ongelmana on mm.Foregenen nukleiinihappouuttosarja, ei käytä DNaasi/RNaasi eikä myrkyllisiä orgaanisia reagensseja koko toimenpiteen ajan, nopea ja turvallinen, javaikutus onhyvä(sanoi vahingossa, että se oli kalju, mutta tiedän, että haluat tietää).

Esimerkki 1: Genomisen DNA:n uuttosaanto ja puhtaus

Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) käsittelee maaperänäytteitä eri lähteistä, ja saadun genomisen DNA:n määrä ja puhtaus on esitetty seuraavassa taulukossa:
Esimerkki 2: Kudos-RNA:n uuttosaanto ja puhtaus

Animal Total RNA Isolation Kit (RE-03012) käsitteli erilaisia ​​kudosnäytteitä, ja saadun RNA:n määrä ja puhtaus on esitetty alla olevassa taulukossa (hiiren kudos):
Älä kuitenkaan usko, että olet valmis OD-arvon kanssa.Onko sinulla huolta avainkohdista, jotka piirsin sinulle etupuolelle?

Ilmoitus

Fragmentoituneet nukleiinihappomolekyylit lasketaan myös absorbanssissa.Olettaen, että sinulla on genomisia DNA-tähteitä RNA:ssa, OD-arvosi näyttää olevan erittäin korkea, mutta RNA:n todellista pitoisuutta ei voida määrittää.Onko RNA:tasi Ei ole selvää, tapahtuuko hajoamista, joten tarvitsemme silti kattavan arviointimenetelmän antaaksemme tarkemman arvion, toisin sanoen MIQE:ssä mainitun nukleiinihapon eheyden arvioinnin.