Laboratoriotestit alkavat näytteenotolla, ja näytteenotto on helpoin jättää huomiotta.Näytteenoton kannalta tärkeintä on valita oikea näytetyyppi, käyttää asianmukaisia ​​näytteenottotyökaluja sekä suorittaa kohtuullinen kuljetus ja käsittely.

I. Näytetyyppi

Yleiset näytetyypit ovat seuraavat:

Näytteenottomenetelmä voi viitata uuden koronaviruksen ympäristöseurannan teknisiin eritelmiin maatalouskaupan (basaari) markkinoilla”:

1. Vanupuikkonäytteitä kurkun vanupuikoista, käsistä, vaatteista ja muista ammatinharjoittajien esineistä: virusnäyteputkessa on käytettävä virussäilöntäliuosta ja tunkeuduttava kokonaan näytteenottovanupuikoihin.Maan pinta) levitetään toistuvasti ja huuhdellaan yli 3 kertaa.Samanaikaisesti on tarpeen suorittaa monipistehajautettu näytteenotto näytekappaleen pinnalle.

2. Elintarvikepinnan pyyhkäisynäytteet: Ruokanäytteitä ei voida ottaa suoraan.Kerättävä ruoka tulee erottaa huolellisesti ja säilyttää puhtaassa näytepussissa ennen vanupuikkonäytteiden ottamista.Virusnäytteenottoputkessa olevaa virussäilöntäliuosta on käytettävä, kun näytteenottovanupuikko on liotettu kokonaan, kerättävän ruokanäytteen pinta toistuvasti levitetään ja huuhdellaan yli 3 kertaa.Samalla on tarpeen suorittaa monipistehajautettu näytteenotto näytepinnalle.

3. Jätevesinäytteet: Valitse viemärijärjestelmän jakautumisen mukaan markkinoilla 2-3 jäteveden näytteenottopaikkaa keskittyen sisäiseen putkiverkostoon, veden virtaussuunnan alavirtaan tai yhteyteen kunnalliseen putkiverkkoon.Ota vanupuikkonäyte upottamalla se jäteveteen näytteenottovanupuikolla, jotta se adsorboi jäteveden, ja huuhtele se näytteenottoputkessa yli 3 kertaa.Käytä jätevesinäytteiden keräämiseen polyetyleenimuovipulloja 30-500 ml:n jätevesinäytteiden keräämiseen;yli 500 ml:n jäteveden keräämiseen voidaan käyttää polyetyleenimuovikauhoja tai paikan päällä olevaa vesinäytteen erityistä rikastuslaitetta.Samanaikaisesti jätevesinäytteenottopaikalle on suoritettava hajautettu monipistenäytteenotto.

4. Eläinnäytteet: Elävistä eläimistä näytteenottopyyhkeillä voidaan kerätä vanupuikkoja kehon pinnalta, suunielun ja peräaukon pyyhkäisynäytteitä, ja myös uloste- tai eritenäytteet voidaan kerätä ja kirjata muistilapulle vastaavasti.Jos eläinnäyte on nyljetty jne., käytä vanupuikkoja kehon pinnan ja ruumiinontelon vanupuikkonäytteiden keräämiseen.Virusnäytteenottoputkessa olevaa virussäilöntäliuosta on käytettävä, jotta se imeytyy kokonaan näytteenottovanupuikkuun, ja sen jälkeen toistetaan kerättävän elintarvikenäytteen pinnan levitys.Shabu yli 3 kertaa.Samalla on tarpeen suorittaa monipistehajautettu näytteenotto näytepinnalle.

5. Muut laitteet: eläinten kuljetukseen ja jalostukseen tarkoitetut säiliöt, kuten häkit tai kalasäiliöt.Ensinnäkin tarkkaile tai ymmärrä säiliössä säilytettävien ja kasvatettujen eläinten erityistyypit ja ota näytteitä säiliön sisäseinältä tai nestemäisiä näytteitä sisällöstä.

6. Kerää aerosolinäytteitä paikoista, joissa ihmiset kokoontuvat, huonosti tuuletetuilta paikallisilta kauppapaikoilta, toimistoilta ja lepohuoneilta.

II. Näytteenottovälineet
1. Verenottoputki
Jos joudut myöhemmin tekemään nukleiinihappotestejä ja antikoagulanttinäytteitä, on suositeltavaa käyttää EDTA-antikoagulanttia sisältävää tyhjiöverisuonetta veren keräämiseen;seeruminäytteisiin on suositeltavaa käyttää tyhjiöverisuonetta ilman antikoagulanttia.

2. Näytteenottopuikko

Kalsiumalginaattipyyhkeiden tai puutankojen sijaan suositellaan polypropeenipuikkoja, koska ne voivat sisältää aineita, jotka inaktivoivat tiettyjä viruksia ja estävät PCR-testauksen.Vanupuikkoja ei voi käyttää, koska puuvillakuiduilla on voimakas proteiinin adsorptio, eivätkä ne eluoitu helposti myöhempään säilöntäliuokseen.

Uusien koronavirusnukleiinihappojen 10-in-1 sekakeräyksen ja havaitsemisen teknisissä eritelmissä määrätään selkeästi, että "näytteenottopuikko tulee olla polyesteristä, nailonista ja muista ei-puuvilla- ja kalsiumalginaattimateriaaleista ja kahvan tulee olla ei-puumateriaalia.Murtumiskohta on noin 3 cm:n päässä vanupuikkopään yläosasta, joka on helppo rikkoa."

Yhdysvaltojen CDC mainitsi myös "Käytä vain synteettisiä kuitupuikkoja, joissa on muovi- tai lankavarret.Älä käytä kalsiumalginaattipuikkoja tai puuvarrellisia vanupuikkoja,koska ne voivat sisältää aineita, jotka inaktivoivat joitain viruksia ja estävät PCR-testauksen.

Tällä hetkellä laajalti käytetty on kertakäyttöinen steriili nylon flocking puikko yhdistettynä muovisauva.Flocking-puikolla on parempi veden imeytyminen ja vapautumisnopeus.Eri näytteenottopaikkojen mukaan myös vanupuikkopäässä on eri kokoja ja kuituja.Paksuus.”

3. Näyte kuljetussäilöntäratkaisusta

Viruksen inaktivointisäilöntäliuos: sopiva määrä guanidiinisuolan konsentraatiota ja useat viruksen hajoamiskomponentit voivat hajottaa viruksen suoraan vapauttaen nukleiinihappoa, inaktivoida RNaasin ja DNaasin ja varmistaa nukleiinihapon eheyden, jota voidaan käyttää myöhempään qPCR-detektioon.Sitä ei voida käyttää virusten viljelyyn ja eristämiseen.

Viruksen kuljetus- ja säilytysliuos: sisältää viruksen selviytymiseen tarvittavia suoloja, aminohappoja, vitamiineja, glukoosia ja proteiinia, jotka voivat ylläpitää viruksen aktiivisuutta.Sitä voidaan käyttää jatkossa viruksen nukleiinihappouuttoon ja havaitsemiseen, ja sitä voidaan käyttää myös viruksen viljelyyn ja erottamiseen.

4. Näytteen säilytysputki ja näytepussi

Näytteen säilytysputken tulee olla steriili muoviputki, jossa on kierrekorkki, joka ei adsorboi nukleiinihappoa.Jokainen näyteputki on peitettävä näytepussilla, jotta estetään näytteen vuotaminen ja kontaminaatio.

III.Häiritsevät aineet näytteessä

Häiritsevät aineet PCR-kokeissa

1. endogeeninen häiriö

Kehonäytteessä olevat aineet voivat häiritä muiden aineiden havaitsemista.

Veri:hemi (> 1 mg/ml), hemiini (> 0,1 ng/μl), triglyseridit, IgG jne.;

Virtsa:urea (20 mM);

Jakkara:kasvien polysakkaridit, kolaatti;

Kudos:proteaasi, kollageeni;

Maito: proteaasi, kalsiumioni;

Huumeet: antibiootit, viruslääkkeet, hormonit jne.

muu.

2. eksogeeninen häiriö

Se tulee aineista, jotka voivat häiritä muiden aineiden havaitsemista in vitro.Näytteiden lisäaineet ja aineet, jotka voivat joutua kosketuksiin näytteenoton ja käsittelyn aikana:

Testaa tarvikkeita: seerumin erotusgeeli, näytteenkeräyssäiliö ja kumitulppa, katetri, katetrin huuhteluneste, käsinejauhe jne.

Antikoagulanttihepariini (> 0,1 U/ml), EDTA (> 0,5 mM) jne.;

Orgaaniset liuottimet: isopropanoli (>0,1 IU/ml), betaiini, dimetyylisulfoksidi, formamidi, glyseriini, PEG jne.;

Desinfiointiaineet: alkoholit (etanoli>1%), aldehydit, fenolit (fenoli>0,2%), peroksidit, vahvat hapot (HCL), vahvat emäkset (NaOH) jne.;

Pesuaine:SDS (> 0,005 %);

Maaperä: Humus

Väriaine: Indigo

muu.

Varsinaisissa ulkona olevissa näytteenottoolosuhteissa, kuten ympäristönäytteitä otettaessa, näytteet voivat sisältää erilaisia ​​häiritseviä aineita ja häiritsevien aineiden koostumus on kussakin paikassa erilainen, mikä edellyttää PCR-häiriökokeiden suorittamista paikallisten olosuhteiden mukaan.

IV.Näytteiden säilytys- ja kuljetusolosuhteet

Juuri kerätyt kliiniset näytteet tulee lähettää laboratorioon 2–4 tunnin kuluessa keräämisestä 2–8 °C:ssa.Säilytä 4 ℃ 24 tunnin sisällä.Viruksen eristämiseen ja nukleiinihappojen havaitsemiseen käytetyt näytteet tulee testata mahdollisimman pian.Näytteet, jotka voidaan testata 24 tunnin sisällä, voidaan säilyttää 4 °C:ssa;näytteet, joita ei voida havaita 24 tunnin kuluessa, tulee säilyttää -70°C:ssa tai sen alle (jos ei - Säilytä 70°C:ssa jääkaapissa -20°C:ssa).

Yhteenveto:Näytteiden standardoitu keräys, kuljetus ja varastointi ovat olennaisia ​​myöhempiä testauksia varten.Monien laboratoriotestien väärät negatiiviset tulokset johtuvat näytteiden virheellisestä keräämisestä, kuljetuksesta ja varastoinnista, mikä johtaa viruksen nukleiinihapon hajoamiseen.Monet laboratoriot jättävät kuitenkin edelleen huomiotta näytteenoton merkityksen.Toivon, että tämä artikkeli herättää kaikkien huomion näytteenottoon ja lisää tieteellistä ja järkevämpää näytteenottoa!

Aiheeseen liittyvä tuote:

SARS-CoV-2:n nukleiinihapon tunnistussarja (I) (multipleksinen PCR-fluoresoiva koetinmenetelmä) - Brasiliasta, Etelä-Afrikasta ja Isosta-Britanniasta peräisin olevien mutanttien havaitsemiseen