Kuinka paljon tiedät

Tietoja Nukleiinihapon uuttaminen

Puhdistetun nukleiinihapon alku ja loppu

Kaikki on alussa vaikeaa, puhdistettua nukleiinihappoa on eniten

Molekyylikokeiden aloittaminen myöhempiä kokeita varten

Menestyksellä tai epäonnistumisella on ratkaiseva vaikutus.

Trace/ultra-trace UV-spektrofotometri on monien tieteellisten tutkijoiden suosima, koska sillä voidaan havaita nukleiinihappopitoisuudet sekä proteiini- ja suola-ionijäämät yksinkertaisesti, nopeasti ja taloudellisesti.

Kuten me kaikki tiedämme, A260 tarkoittaa nukleiinihappoabsorbanssin OD-arvoa, A280 tarkoittaa proteiinipitoisuuden absorbanssin OD-arvoa, A230 tarkoittaa suola-ionipitoisuuden absorbanssin OD-arvoa, joten A260 voi muuntaa nukleiinihappopitoisuutta, A260/280 tarkoittaa proteiinijäännöstä, A260/230 tarkoittaa suola-ionijäännöstä, mutta tämä on vain sääntöön perustuva mittaus, mutta tämä on vain tutkijoiden löytämä tulos.tavanomaista”uskoa, että se voi selittää DNA:n ja RNA:n puhtaudenjossain määrin.Se ei ole ainoa standardi nukleiinihapposaannon ja -puhtauden tunnistamisessa, sitä käytetään vain referenssinä, eikä se ole "kultastandardi".

Thermo Fisher ND-2000 -käsikirja korostaa testitulosten luotettavuutta

Syynä on se, että mikro/ultramikro-UV-spektrofotometrillä saadut tulokset heijastavat vain nukleiinihapon saantoa ja puhtautta sivulta katsottuna, ja vaikuttavia tekijöitä on monia (optinen reitti, näytteen tilavuus, näytepitoisuus, pH-arvo, muut absorbanssimittaukseen vaikuttavat ionit jne.), mitattu OD-arvo ei välttämättä ole tarkka.Samanaikaisesti absorbanssiarvon määritysmateriaalin spesifisyyden puutteen vuoksi yksijuosteisella DNA:lla, kaksijuosteisella DNA:lla, RNA:lla, dNTP:llä ja joillakin proteiineilla on kaikilla absorptiohuiput 260 nm:n aallonpituudella, eikä pelkällä A260:lla määritetty pitoisuus välttämättä ole oikea DNA tai RNA.Keskittymistä ja sen eheyttä ja hajoamista ei voida arvioida.

Joten kuinka arvioida puhdistetun nukleiinihappomme laatua?Sen lisäksi, että havaitsemiseen käytetään mikro/ultramikro-UV-spektrofotometriä, tarvitaan myös menetelmiä, kuten agaroosigeelielektroforeesia, jotta voidaan visuaalisesti näyttää nukleiinihapon puhtaus ja eheys sekä osoittaa pitoisuus tietyssä määrin.Tällä tavalla eri menetelmien havaitsemistuloksista saatu nukleiinihapposaanto ja puhtaus ovat uskottavia.

Kokeellinen kaaviovertailu

H1299-solujen genominen DNA uutettiin käyttämällä yrityksen A DNA Extraction -pakkauksia, ja havaittiin merkittävää epäpuhtauskontaminaatiota, mikä johti korkeisiin OD-arvoihin.

(OD-mittausarvo ja vastaava elektroferogrammi)

Arviointiindeksi

Onko olemassa "kultastandardia" nukleiinihappojen saannon ja laadun testaukselle?

Sikäli kuin tiedämme, ei ole olemassa yksinkertaista, nopeaa ja halpaa menetelmää.Olipa kyseessä spektrofotometri, geelielektroforeesi tai massaspektrometria, ne kaikki heijastavat liuoksen nukleiinihapon pitoisuutta ja puhtautta eri näkökulmista, ja ne on arvioitava toisiinsa viitaten.

Paras arviointiindeksi on ainakokeellinen seurantasovellus.Se ei vaikuta käänteistranskription ja PCR-monistuksen tehokkuuteen.Luotettavien monistustuotteiden ja Ct-arvojen saaminen ja täydellisen sekvenssin saaminen sekvensoimalla on onnistunut nukleiinihappouutto.

Yhteenvetona voidaan todeta, että pelkän suhdeteorian näkemys tulisi haastaa näkemyksellä "hyvien loppupään kokeellisten tulosten käyttämisestä hyvinä uuttoparametreina"!

Suositeltavat Foregene DNA RNA:n uuttosarjat korkean DNA/RNA-puhtauden saavuttamiseksi:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/