Johtaa

Pitkä ei-koodaava RNA, lncRNA on ei-koodaava RNA, jonka pituus on yli 200 nukleotidia, yleensä välillä 200-100000 nt.lncRNA säätelee geenien ilmentymistä epigeneettisellä, transkription ja transkription jälkeisellä tasolla ja osallistuu X-kromosomin hiljentämiseen, genomin painamiseen ja kromatiinin modifiointiin, transkription aktivaatioon, transkription häiriöihin, tuman kuljetukseen, solusyklin säätelyyn, solujen erilaistumisen säätelyyn ja annoskompensaatiovaikutuksiin (annostusten kompensointiprosessit ovat tällä hetkellä ihmisen sairauksien ehkäisyä ja monia muita tärkeitä kompensaatiovaikutuksia). biolääketieteen alan kuumat pisteet.

01  LncRNA:n tyypit ja ominaisuudet

lncRNA on jaettu useisiin tyyppeihin sen muodostumisen eri lähteiden mukaan, kuten yllä olevasta kuvasta näkyy.Sillä on seuraavat ominaisuudet:

1. lncRNA:t ovat yleensä pidempiä, ja niissä on dynaaminen ilmentyminen ja erilaiset silmukointimenetelmät erilaistumisen aikana
2. Verrattuna koodaaviin geeneihin, lncRNA:lla on yleensä alhaisempi ilmentymistaso
3. Useimmilla lncRNA:illa on ilmeinen ajallinen ja spatiaalinen ilmentymisspesifisyys kudosten erilaistumis- ja kehitysprosessissa
4. Kasvaimissa ja muissa sairauksissa on tyypillisiä ilmentymiä
5. LncRNA:n subsellulaariset sijainnit ovat erilaisia
6. Sekvenssin säilyvyys on alhainen, mutta funktiolla on tietty säilyvyysaste jne.

02 Usein kysyttyjä kysymyksiä LncRNA-käänteistranskriptiosta

Solujen alhaisesta lncRNA-pitoisuudesta, pitkästä pituudesta ja korkean tason rakenteesta johtuen sellaisella RNA:lla on usein monimutkaisia ​​rakenteita, kuten varsisilmukoita tai hiusneuloja, ja RT-qPCR on altis epäonnistuneen käänteistranskription tai alhaisen tehokkuuden ongelmille.

03 LncRNA-käänteistranskriptioliuos

Keskeisessä säännössä prosessia, jossa RNA-virukset käyttävät omaa käänteistranskriptaasiaan DNA:n syntetisoimiseen käyttämällä RNA:ta templaattina, kutsutaan käänteiskopioijaksi.Prosessia, jossa RNA-viruksen käänteistranskriptaasia käytetään cDNA-templaatin syntetisoimiseen in vitro, kutsutaan käänteistranskriptioksi.Käänteistranskriptiojärjestelmään sisältyvät pääelementit: RNA-templaatti, käänteistranskriptaasi, alukkeet ja muut komponentit.

1.RNA-templaatti

RNA-templaatin vaikutus käänteistranskriptioon heijastuu sen rakenteessa, puhtaudessa ja eheydessä.Mitä korkeampi uutetun RNA:n puhtaus ja eheys on, sitä suurempi on käänteistranskription tehokkuus ja sitä tarkempia seuraavat kvantitatiiviset tulokset.Yleisesti käytetyillä RNA-uuttoreagensseilla puhdistettu RNA sisältää usein jäämiä alkoholista ja guanidiinisuoloista, joilla on voimakas inhiboiva vaikutus useimpiin käänteiskopioijaentsyymeihin.

2. Käänteinen transkriptaasi

Käänteistranskriptaasilla on keskeinen vaikutus koko käänteiskopiointijärjestelmään.Sopiva lämpötila useimmissa laboratorioissa käytettävälle käänteiskopioijalle on yleensä 42 °C.Itse asiassa korkean tason RNA-rakenteen avaaminen vaatii korkeamman lämpötilan, ja vaatimukset käänteiskopioijalle ovat korkeammat.

3.Primer

Käänteistranskriptioalukkeet sisältävät geenispesifiset alukkeet, satunnaiset alukkeet ja Oligo dT -alukkeet.Useimmat lncRNA:t eivät sisällä polyA-pyrstöjä, ja on tärkeää sovittaa satunnaiset alukkeet oikein Oligo dT:n kanssa.

4. Muut komponentit

Ottaen huomioon, että RNA on erityisen helppo hajottaa, komponenttien lisääminen käänteistranskriptiojärjestelmään voidaan minimoida, mikä voi tehokkaasti estää RNaasin pääsyn sisään ja varmistaa käänteistranskription sujuvan etenemisen.

Foregeenisaa RNA-templaatista käänteistranskription qPCR:ksi

Ohjaa lncRNA-tunnistusta kattavasti

Eläimen kokonais-RNA IlohdutustaKit (gDNA-poistokolonnin kanssa)

Solun kokonais-RNA IlohdutustaKit (gDNA-poistokolonnin kanssa)

Lnc-RT HeroTM I (gDNaasilla) (Super Premix ensimmäisen juosteen cDNA-synteesiin lncRNA:sta)

Reaaliaikainen PCR EasyTM-SYBR Green I

Aetuja ofRNA:n uutto:

Sarja käyttää kolmannen sukupolven RNA-uuttotekniikkaa, ei tarvitse käyttää DNaasia.

11 minuuttia 96-, 24-, 12- ja 6-kuoppalevyviljelmistä soluista, tehokas gDNA-vapaan, erittäin puhtaan, korkealaatuisen solun kokonais-RNA:n uuttaminen.

LncRNA-käänteistranskription edut:

Käänteistranskriptiojärjestelmä, joka on erityisesti kehitetty LncRNA:lle poistamaan nopeasti genomisen DNA:n kontaminaation.

Käänteistranskriptiojärjestelmällä on korkea lämpöstabiilius ja silti hyvä käänteistranskriptiokyky 50 °C:ssa.

Mallit, joissa on korkea GC-pitoisuus ja monimutkainen toisiorakenne, voidaan kääntää suurella tehokkuudella.

Edutof qPCR:

Hot start Foregene Taq Polymerase -tuotteella on korkeampi vahvistustehokkuus, korkeampi vahvistusherkkyys ja korkeampi vahvistusspesifisyys

Optimoitu Real PCR Easy Mix tekee SYBR Green I:stä korkeamman tunnistusherkkyyden, ja sen fluoresenssin intensiteetti on 3-5 kertaa suurempi kuin vastaavilla tuotteilla, jotka voivat täyttää erityyppisten fluoresenssikvantitatiivisten kokeiden tarpeet.