Hot-start Taq-entsyymiä käytetään laajalti.Tavalliseen DNA-polymeraasiin verrattuna kuumakäynnistetty Taq-entsyymi voi tehokkaasti välttää epäspesifisen monistumisen ja alukedimeerien muodostumisen ja parantaa tehokkaasti kohdegeenin monistumisen onnistumisastetta.Erityisesti geneettisen testauksen alalla kuumakäynnistys Taq-entsyymi on tunnistettu teollisuudessa pakolliseksi standardiksi, eikä tavallista DNA-polymeraasia tule käyttää.Kuten yllä olevasta voidaan nähdä, kuumakäynnistys-Taq-entsyymejä käytetään laajalti.Tällä hetkellä kotimarkkinoilla on lukuisia kuumakäynnistys-Taq-entsyymejä, mutta korkealaatuisia kuumakäynnistys-Taq-entsyymejä ei ole paljon.Miten meidän pitäisi valita niin monien kuumakäynnisteisten Taq-entsyymituotteiden edessä?

1. Valitse kuumakäynnistys Taq-entsyymi, jolla on korkea monistusteho

PCR-monistuksen tehokkuus liittyy läheisesti Taq-entsyymin suorituskykyyn.Kun hyvä Taq-entsyymireaktiojärjestelmä on optimoitu, monistustehokkuus on yli 95 % ja alkuperäisen templaattimäärän monistusalue on laaja.Tyydyttävä monistus voidaan saada, kun kohdegeenipitoisuus on alhainen, eikä ole helppoa myrkytyä, kun templaattimäärä on suuri ja eksponentiaalinen monistusjakso on pitkä.Taq-entsyymillä, jonka suorituskyky on huono, vaikka reaktiojärjestelmä olisi optimoitu monta kertaa, amplifikaatiotehokkuus on silti alle 90%, vahvistuskäyrän "S"-muoto ei ole ilmeinen, kaltevuus on pieni ja käyrä on tasainen.Kun templaatin määrä on pieni, sitä ei voida vahvistaa, ja kun templaatin määrä on suuri, vahvistusvaikutus ei ole ihanteellinen.Siksi korkean monistustehokkuuden omaavien DNA-polymeraasien valinta on ratkaisevan tärkeää PCR:n ja qPCR:n onnistumisen kannalta.

2. Valitse kuumakäynnistys Taq-entsyymi, jolla on vahva entsyymiteho

Taq-entsyymin entsymaattinen teho liittyy amplifikaatiotehokkuuteen.Yleensä mitä voimakkaampi kuumakäynnistyksen Taq-entsyymin entsymaattinen teho on, sitä pidempi on PCR-monistuksen eksponentiaalinen kasvujakso, mitä tyypillisempi "S-muotoinen" käyrä, sitä korkeampi fluoresenssisignaaliarvo ja sitä paremmin soveltuvat multipleksi-PCR-detektioon.Brand DNA-polymeraasit, joilla on heikko entsymaattinen voima, voivat yleensä tukea vain 2-plex-reaktioita.Kun tehdään 3-plex-reaktioita, vahvistuskäyrä on matala, fluoresenssisignaalin arvo on alhainen, eikä tyypillistä vahvistuskäyrää ole, joten tuloksia on vaikea arvioida.

3. Valitse kuumakäynnistetty Taq-entsyymi, jolla on korkea herkkyys

Yleisesti ottaen DNA-polymeraasilla on korkea amplifikaatiotehokkuus ja korkea herkkyys, mutta siinä on myös epäjohdonmukaisuuksia.Jos monistettavan näytteen kohdegeenin runsaus on alhainen, on suositeltavaa testata Taq-entsyymin monistusherkkyys.Yleisin havaitsemismenetelmä on suorittaa 10- tai 5-kertainen gradienttilaimennus kohdegeeniplasmidifragmentista, suorittaa PCR-detektio pienemmällä laimennuksella ja valita kuumakäynnistys-Taq-entsyymi, jolla on korkeampi havaitsemisherkkyys.

Edellä olevasta näkyy, että tutkijoiden on valittava omien kokeellisten vaatimustensa ja rahoitusehtojensa mukaan.On parasta tehdä gradienttilaimennusamplifikaatiokoe kuumakäynnistyksen Taq-entsyymin monistustehokkuuden ja herkkyyden havaitsemiseksi.

Esimerkki Foregenestä's Taq DNA -polymeraasi:

Foreasy HS Taq DNA -polymeraasi

Kuvaus

Foreasy HS Taq DNA Polymerase on DNA-polymeraasi, joka ekspressoituu Escherichia coli -muokkausbakteereissa geenirekombinaatioteknologialla.Entsyymi yhdistetään ainutlaatuiseen reaktiopuskuriin, mikä tekee tuotteesta erittäin kestävän ja yhteensopivan ja voi käyttää suoraan näytelysaattia (Foregene Lysis -järjestelmä) mallina detektioreaktioihin.

Sovellus

Puhdistettujen templaattien ja puhdistamattomien templaattien kvalitatiivinen PCR ja kvantitatiivinen PCR-detektio.

Laadunvalvonta

1.Ei havaittu eksogeenistä nukleaasiaktiivisuutta

2. PCR-menetelmä jäännösgenomisen DNA:n havaitsemiseksi ilman isäntä

3. Se voi tehokkaasti monistaa yhden kopion geenejä ihmisen genomissa

4. Säilytä huoneenlämmössä viikon ajan ilman ilmeisiä aktiivisuusmuutoksia

Tuotetiedot: https://www.foreivd.com/foreasy-hs-taq-dna-polymerase-product/