Luo PCR-kokeilu SOP koehenkilöstön käyttäytymisen standardoimiseksi.
Kokeen suorittaja noudattaa tiukasti toimintaohjeita ja minimoi inhimillisistä tekijöistä mahdollisesti aiheutuvan PCR-saasteen tai estää saastumisen esiintymisen.Lisäksi kokeen tekijällä tulee olla vastaavat ammatilliset tiedot ja taidot, mukaan lukien asiantuntemus asiaan liittyvien laitteiden käytössä, koko työprosessin selkeyttäminen, kontaminaatioiden käsittelymenetelmien ja laboratorion laadunvalvontamenetelmien hallinta sekä kyky tulkita testituloksia oikein.
Perustetaan standardi PCR-laboratorio.
PCR-laboratorio on periaatteessa jaettu neljään osa-alueeseen, jotka ovat reagenssin valmistusalue, näytteenkäsittelyalue, monistusalue ja monistustuotteen analyysialue.Kaksi ensimmäistä aluetta ovat vahvistusta edeltäviä alueita, ja kaksi viimeistä aluetta ovat vahvistuksen jälkeisiä alueita.Vahvistusta edeltävä vyöhyke ja vahvistuksen jälkeinen vyöhyke tulisi erottaa tiukasti toisistaan.Koemateriaalit, reagenssit, tallennuspaperi, kynät, puhdistusaineet jne. voivat virrata vain esivahvistusalueelta vahvistuksen jälkeiselle alueelle, eli reagenssin valmistelualueelta → näytteenkäsittelyalueelta → vahvistusalueelta → vahvistustuotteen analyysialueelta, eivätkä ne saa virrata taaksepäin .Laboratorion ilmavirran tulee myös virrata esivahvistusalueelta vahvistuksen jälkeiselle alueelle, eikä se saa virrata taaksepäin.Ihanteellinen PCR-laboratorion suunnittelu on esitetty alla:
Kuva A: Ihanteellinen PCR-laboratorion asetustila alipaineella puskurihuoneessa
Kuva B: Ihanteellinen PCR-laboratorion asetustila positiivisella paineella puskurihuoneessa
Kuvassa A ja kuvassa B olevien PCR-laboratorion asetuskaavioiden tulisi olla ideaalimpi asetustila, ja laboratorio, jolla on olosuhteet, voi viitata tähän tilaan suunnittelussa.Tavallisissa laboratorioissa suositellaan, että PCR-monistusalue ja tuoteanalyysialue voidaan erottaa toisistaan, ja kannen aukkoa tulisi vähentää mahdollisimman paljon näytteenkäsittely- ja PCR-monistusalueella.Muista: Tuoteanalyysialueella olevien tuotteiden ja kokeellisten tarvikkeiden vieminen näytteenkäsittelyalueelle ja PCR-monistusalueelle on ehdottomasti kielletty.
Jos laboratorio suorittaa vain PCR-detektiota ja -tunnistusta, on suositeltavaa käyttää fluoresoivaa kvantitatiivista PCR:ää tavanomaisen PCR:n sijaan.
Fluoresenssikvantitatiiviset PCR-detektiotulokset voidaan kerätä ja analysoida fluoresenssisignaaleilla, joten kantta ei tarvitse avata elektroforeesia varten reaktion jälkeen, jolloin vältetään PCR-tuotteen kontaminaatio, joka aiheutuu reaktiotuotteiden vuotamisesta aerosoleiksi.Jos lisäät korkin aukkojen määrää geelielektroforeesin latausvaiheen aikana, aerosolikontaminaatiota tapahtuu todennäköisesti.On suositeltavaa edistää kvantitatiivisen PCR:n käyttöä ja korvata asteittain kvalitatiivinen PCR.
PCR-reaktioon käytetään UNG:n anti-PCR-tuotteen kontaminaatiojärjestelmää.
Järjestelmä käyttää dUTP:tä dTTP:n sijaan.PCR-reaktion jälkeen kaikki PCR-tuotteet (DNA-fragmentit) liitetään dUTP:hen;seuraavassa PCR-reaktion kierroksella järjestelmään lisättyä UNG-entsyymiä inkuboidaan 37 °C:ssa 5 minuuttia ennen PCR:ää, mikä voi spesifisesti hajottaa kaikki dUTP:tä sisältävät DNA-fragmentit ja suorittaa sitten PCR-reaktion.Tämä voi poistaa PCR-tuotteiden aiheuttaman aerosolikontaminaation kokonaan.Vaikutus näkyy alla olevassa kuvassa:
Huomautus: Suoraan PCR-sarjaan voit valita Foregenen anti-PCR-tuotekontaminaation järjestelmän sarjatuotteetEhdottaa
Laajamittaista genotyyppitestausta tekeville laboratorioille on erittäin suositeltavaa käyttää UNG anti-PCR -tuotteiden kontaminaatiojärjestelmää reagenssien testaamiseen kohtuullisten laboratorioiden rakentamisen lisäksi.
Muistutus: Tämän järjestelmän käyttö ei voi poistaa jo aiheutettua PCR-tuotteen kontaminaatiota.Siksi UNG-järjestelmää tulisi käyttää kyseisen testin alussa ja UNG-järjestelmää PCR-monistukseen, jotta estetään PCR-tuotteiden kontaminaatio Väärä positiivinen.
On suositeltavaa käyttää Foregenen Direct PCR-UNG -järjestelmää suoritettaessa laajamittaisia testejä, kuten:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG；
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG；
Animal Tissue Direct PCR Kit-UNG；
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Tämä sarja sarja Foregeneltaei vain pysty suorittamaan PCR-detektiota nopeasti ja suuressa mittakaavassa, vaan myös tehokkaasti ehkäisemään ja hallitsemaan PCR-tuotteen kontaminaatiota.
Postitusaika: 19.3.2021
