1：Vaihda kokeelliset tarvikkeet ajoissa

Aseta (NTC) negatiivinen kontrolli ja toista se monta kertaa.Kun laboratoriossa havaitaan PCR-tuotteen kontaminaatiota, vaihda kaikki kokeelliset tarvikkeet ajoissa.Kuten: laimenna ja valmistele alukkeet uudelleen, steriloi pipetin kärki, EP-putki, ddH2O jne., vaihda uuteen pipettiin ja lainaa väliaikaisesti muita laboratorioita PCR-kokeiden suorittamiseen.Kontaminoitunutta laboratoriota on tuuletettava ja säteilytettävä ultraviolettisäteillä, kunnes PCR-tuotteen kontaminaatio on eliminoitu ennen kokeen jatkamista.

2: Pidennä UV-altistusaikaa

On syytä huomata, että DNA-kontaminaation poistamiseksi säännöllistä ultraviolettisäteilyä tulisi pidentää 2 tunnilla kuin tavallisesti.Silti UV-säteilyn vaikutus DNA-kontaminaation pienten fragmenttien (alle 200 bp) poistamiseen ei ole edelleenkään hyvä.

Ultraviolettiaallonpituus (nm) on yleensä 254/300 nm, ja se riittää säteilyttämiseen 30 minuuttia.On huomioitava, että valittaessa UV-säteilyä jäännös-PCR-tuotteiden kontaminaatioiden poistamiseksi, PCR-tuotteen pituus ja emästen jakautuminen tuotesekvenssissä tulee ottaa huomioon.UV-säteily on tehokas vain pitkille yli 500 bp:n fragmenteille, ja sillä on vain vähän vaikutusta lyhyisiin fragmentteihin.

UV-säteilytyksen aikana PCR-tuotteen pyrimidiiniemäkset muodostavat dimeerejä.Nämä dimeerit voivat lopettaa pidentymisen, mutta kaikki DNA-ketjun pyrimidiinit eivät voi muodostaa dimeerejä, ja UV-säteily voi myös rikkoa dimeerejä..Dimeerin muodostumisaste riippuu UV-aallonpituudesta, pyrimidiinidimeerin tyypistä ja dimeerikohdan vieressä olevien nukleotidien sekvenssistä.Siksi, jos PCR-monistetut fragmentit ovat pieniä, on suositeltavaa käyttää UNG anti-PCR -tuotteen kontaminaatiojärjestelmää.

3: Yleisesti käytetyt DNA-saasteen poistajat

Pipettejä lisättäessä syntyy helposti aerosoleja, joita on vaikea välttää, ja se laskeutuu nopeasti.Siksi on epäilemättä hyvä valinta käyttää usein erityisiä DNA-saasteenpoistajia DNA-saasteiden leviämisen estämiseksi.

4: Käytä UNG:n saastumisenestojärjestelmää

Kun PCR-tuotteen kontaminaatio on poistettu, testauslaboratorio voi käyttää UNG:n anti-PCR-tuotteen kontaminaatiojärjestelmää estääkseen PCR-tuotteen kontaminaation.Yleisissä laboratorioissa voit suorittaa yksinkertaisia ​​kokeellisia osioita, erottaa PCR-tuotealueen tiukasti muista alueista, vahvistaa tiettyjä laboratoriosääntöjä ja määräyksiä sekä järjestää asianmukaista koulutusta PCR-tuotteen kontaminaatioiden estämiseksi.

Suositukset: Kohtuullisen PCR-laboratorion perustaminen, hyvän PCR-ympäristön ylläpitäminen, standardien PCR-toimintamenetelmien laatiminen ja kokeiden tiukan toimintatietoisuuden kasvattaminen ovat avaimia PCR-kokeiden saastumisen ehkäisemisessä tai vähentämisessä.