PCR:n synty
PCR (polymeraasiketjureaktio)
Polymeraasiketjureaktion keksimisestä on kulunut yli 30 vuotta.Yli 30 vuoden ajan, sen jälkeen kun monet tutkijat ympäri maailmaa ovat jatkaneet täydentämistä ja parantamista, PCR-teknologiasta on tullut laajimmin ja eniten käytetty ja tärkein perustutkimusmenetelmä koko biotieteiden alalla.
Perinteisen PCR-teknologian laajan soveltamisen pohjalta kehitetyt TouchDown PCR, Real-Time PCR, Multi PCR jne. sekä äskettäin syntynyt Digital PCR (digitaalinen PCR) ovat suuresti rikastaneet useimpien tieteellisten tutkijoiden tutkimusmenetelmiä ja nopeuttaneet huomattavasti nykyaikaisten biotieteiden, erityisesti molekyylibiologian, kehitysprosessia, ovat antaneet suuren panoksen ihmiselämän ja koko elämän tutkimukseen.
Perinteisen PCR-tekniikan viat
Monimutkainen nukleiinihappoerotus japoiminta:
★ Perinteinen PCR-tekniikka: vaaditaan
★ PCR-pohjainen tekniikka: vaaditaan
★ DNA- ja RNA-näytteet: suuret erot, vaikeat toimintavaatimukset
★ Kehon vaarat: myrkylliset reagenssit vahingoittavat kehoa
Perinteisellä PCR-tekniikalla ja johdannaistekniikalla on edellytys nukleiinihappojen erottamiseksi ja puhdistamiseksi
Jokaisen biologisen näytteen on käytävä läpi monimutkainen ja työläs näytekäsittely PCR-tekniikan vaatimukset täyttävien nukleiinihapponäytteiden saamiseksi.
DNA:n ja RNA:n erottaminen ja erottaminen on aina ollut perustehtävä, joka asiaankuuluvien tieteellisten tutkijoiden on toistettava joka päivä.
Näytteiden välisistä valtavista eroista johtuen myös DNA:n ja RNA:n erotus- ja uuttoprosessit ovat hyvin erilaisia.Tämä työ edellyttää operaattorilta korkeaa teknistä osaamista.Perinteiset erotus- ja uuttotekniikat edellyttävät pitkäaikaista kosketusta joidenkin erittäin myrkyllisten kemiallisten reagenssien kanssa.Se aiheuttaa peruuttamattomia vahinkoja käyttäjän keholle ja jopa suoraa vahinkoa kokeen aikana.
Samaan aikaan niille, joilla on suuri määrä näytteitä tutkittavana, nukleiinihappojen erottaminen ja uuttaminen on työvoimavaltaista tehtävää.
Markkinoilla olevat nukleiinihapon eristys- ja uuttosarjat ovat nyt kypsiä, ja merkkejä on monia, mutta ne ovat suunnilleen samat.Olipa kyseessä silikageelikalvokolonnin keskipakosarja tai magneettihelmimenetelmäsarja, se vie paljon aikaa ja on kallista.Sarjan hinnan lisäksi laboratoriovarusteille on asetettu myös erityisvaatimuksia.Magneettihelmimenetelmässä käytetty automatisoitu työasema on hyvin tyypillinen suuren mittakaavan arvolaitteisto, joka on laboratoriolle valtava kustannus.
Yhteenvetona
Ennen PCR-kokeiden suorittamista näytteiden esikäsittely on tutkijoille väistämätön ja aina päänsärky.Kuinka tämä ongelma ratkaistaan ja voidaanko PCR-kokeita suorittaa ilman nukleiinihappojen erottamista ja uuttamista, on aina ollut enemmistön tieteellisten tutkijoiden ja kliinisen laboratorion henkilökunnan ajatus.
Foregenen ratkaisu
Vuosien huolellisen suoran PCR-teknologian ja siihen liittyvien sarjojen tutkimuksen jälkeen Forgene murtautui menestyksekkäästi monien pullonkaulojen läpi ja saavutti menestyksekkäästi suoran PCR:n useille erityyppisille näytteille, joilla on vahva vastustuskyky ja sopeutumiskyky, mikä antoi tutkijoille mahdollisuuden päästä eroon hankalasta ja vaarallisesta nukleiinihappojen erottamisesta ja uuttamisesta.Tämä vähentää huomattavasti kaikkien työvoimaintensiteettiä, nopeuttaa koeprosessia ja säästää tieteellisen tutkimuksen ja testauksen kustannuksia.
Forgenen ymmärrys ja tietämys DirectPCR:stä
Ensinnäkin DirectPCR-tekniikka on suora PCR-tekniikka erilaisille biologisille näytekudoksille.Tässä teknisessä tilanteessa nukleiinihappoja ei tarvitse erottaa ja uuttaa, vaan kudosnäytettä käytetään suoraan kohteena ja kohdegeenialukkeet lisätään PCR-reaktiota varten.
Toiseksi DirectPCR-tekniikka ei ole vain perinteinen DNA-templaatin monistustekniikka, vaan se sisältää myös RNA-templaatin käänteistranskriptio-PCR:n.
Kolmanneksi DirectPCR-tekniikka ei ainoastaan suorita suoraan rutiininomaisia kvalitatiivisia PCR-reaktioita kudosnäytteille, vaan sisältää myös reaaliaikaisia qPCR-reaktioita, mikä edellyttää reaktiojärjestelmän vahvaa kykyä vastustaa taustafluoresenssihäiriöitä ja antagonisoida endogeenisiä fluoresenssin sammuttajia.
Neljänneksi DirectPCR-teknologian kohteena olevat kudosnäytteet vaativat vain nukleiinihappotemplaattien vapauttamista eivätkä poista proteiineja, polysakkarideja, suola-ioneja jne., jotka häiritsevät PCR-reaktiota.Tämä edellyttää, että reaktiojärjestelmän nukleiinihappopolymeraasilla ja PCR-sekoituksella on erinomainen palautuvuuden esto ja sopeutumiskyky, ja ne voivat varmistaa entsyymiaktiivisuuden ja replikaatiotarkkuuden monimutkaisissa olosuhteissa.
Viidenneksi DirectPCR-teknologian kohteena oleville kudosnäytteille ei ole tehty minkäänlaista nukleiinihapporikastuskäsittelyä ja templaattimäärä on hyvin pieni, mikä vaatii reaktiosysteemiltä erittäin suurta herkkyyttä ja monistustehokkuutta.
Johtopäätös
DirectPCR-teknologia on yksi tärkeimmistä teknologisista kehityssuunnista ja innovaatioista viimeisten 30 vuoden aikana PCR-teknologian syntymän jälkeen.Forgene on ja tulee jatkossakin olemaan tämän tekniikan edelläkävijä ja innovaattori.
DirectPCR-teknologian sovellusmahdollisuudet ovat erittäin laajat.Tämän tekniikan jatkuva parantaminen ja edistäminen tuo varmasti kumouksellisia muutoksia tieteelliseen tutkimukseen ja tarkastustyöhön.Tämä on PCR-teknologian vallankumous.
Postitusaika: 21.2.2017
