W:Brother, käänteistranskriptio on valmis ja viimeinen vaihe – fluoresoiva kvantitatiivinen PCR!Hei, veli, mikä on reaaliaikainen kvantitatiivinen PCR?
M: PCR tiedät aina, eikö?
W: Tiedätkö, PCR on polymeraasiketjureaktio, ja se on tekniikka, joka lisää DNA:ta!
M: Se on melkein… Se on tekninen menetelmä monistaa kohdesekvenssi yli miljoona kertaa tiettyjen alukkeiden avulla, mutta tämä osoittaa vain kohdesekvenssin olemassaolon tai puuttumisen, eikä se voi määrittää alkuperäisen templaatin määrää.Fluoresenssikvantitatiivinen PCR on tekninen menetelmä, joka on kehitetty ratkaisemaan tämä ongelma.Reaaliaikainen PCR ja määrä-PCR (qPCR) viittaavat yleensä siihen.
V: Ero tavalliseen PCR:ään on fluoresenssin kvantifiointi?
M:Kyllä, eli jokaisen PCR-syklin laajennusvaiheessa havaitaan fluoresenssisignaalin intensiteetti ja alustava templaatin määrä voidaan laskea signaalin intensiteetin muutoksen mukaan.
W: Se tuntuu niin monimutkaiselta!Pitääkö minun laskea tämä itse?
M: Tämä edellyttää sinun oppimista hitaasti, on parasta pystyä ymmärtämään periaate.Nyt voit keskittyä ensin CT-arvoon, joka on suhteellisen intuitiivista kokeellista dataa ja sen koko vastaa alkuperäisen mallimäärän kokoa.On myös kaavioita, kuten vahvistuskäyrät ja sulamiskäyrät.Heillä on viimeinen sana siitä, onko kokeilusi onnistunut vai ei.
V: Voi veli.Sitten aion tehdä qPCR-kokeen!
M: Kiinnitä erityistä huomiota siihen, ettet lisää malleja reagenssialueelle, sillä muuten käyttämätön seos saastuu helposti!
W: Selvä!

Reaaliaikainen PCR Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

Korkeampi tehokkuus, suurempi spesifisyys
Korkea herkkyys, hyvä yhteensopivuus