Tekijät: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Yksikkö: Jiaozhou Hospital, Dongfang Hospital, joka on sidoksissa Tongjin yliopistoon

Tällä hetkellä päänäytetyyppi hengityselinten patogeenien nukleiinihappojen havaitsemiseksi on kurkun vanupuikko.On olemassa monenlaisia ​​yleisesti käytettyjä näytteiden säilytysratkaisuja, jotka kaikki on jäähdytettävä tai pakastettava kuljetusta ja varastointia varten;Koko alhaisen lämpötilan prosessia on vaikea hallita keräys- ja kuljetusprosessin aikana, ja laadunvalvontaa on vaikea varmistaa ennen näytteen testausta^[1-2].

RNaasi (RNaasi) on endonukleaasi, joka hydrolysoi RNA:ta ja katkaisee pääasiassa fosfodiesterisidoksia nukleotidien välillä.RNaasi-molekyyli on erittäin stabiili, rakenteessa on disulfidisidoksia, eikä sen aktiivisuus vaadi kaksiarvoisten kationien läsnäoloa, joten RNaasi ei denaturoidu helposti ja se on helppo renaturoida jopa korkean lämpötilan tai denaturointiaineiden käytön jälkeen.RNaasit jaetaan endogeenisiin ja eksogeenisiin.Endogeeniset RNaasit voivat vapautua samaan aikaan, kun solut rikkoutuvat.Siksi endogeenisten RNaasien roolin poistaminen on erittäin kriittinen vaihe RNA:n uuttoprosessissa.Eksogeeniset RNaasit ovat laajalle levinneitä.RNaasit ovat ilmassa, ihmisen ihossa, hiuksissa ja syljessä, jotka ovat tärkeitä syitä RNA:n helpolle hajoamiselle^[3].

Tietojen kysely

CANS-CL02-A009 "Lääketieteellisten laboratorioiden laatu- ja pätevyysakkreditointiohjeiden soveltaminen molekyylidiagnoosin alalla" ehdottaa teknisissä vaatimuksissa, että asianmukaiset veden laatustandardit muotoillaan hakemuksen mukaisesti;Kertakäyttöiset ilmatiiviit säiliöt:

RNaasi/luokitus

(1) RNaasi A

Ribonukleaasi A (RNaasi A), joka on peräisin naudan haimasta, on endoribonukleaasi, joka voi hyökätä spesifisesti RNA:n pyrimidiinitähteiden 3'-päähän leikkaamalla vierekkäisten nukleotidien muodostaman sytosiinin tai urasiilin.Fosfodiesterisidos, reaktion lopputuote on 3′ pyrimidiininukleotidi ja oligonukleotidi, jonka päässä on 3′ pyrimidiininukleotidi.

(2) RNaasi T1

Ribonukleaasi T1 (RNase T1) on peräisin Aspergillus orjzaesta, se vaikuttaa spesifisesti guaniinin 3'-pään fosfaattiin, ja katkaisukohta on guaniinin 3'-fosfaatin ja viereisten nukleotidien 5'-hydroksyylin välissä.Reaktion lopputuote on 3'-guanyylihappo ja oligonukleotidifragmentit, joiden lopussa on 3'-guanyylihappoa.

(3) RNaasi H

Ribonukleaasi H (RNaasi H) löydettiin ensin vasikan kateenkorvakudoksesta, ja sitä koodaava geeni on kloonattu Escherichia coliin.Se voi hajottaa spesifisesti DNA:n: RNA-säikeitä RNA-hybrididuplekseissa, mikä johtaa oligonukleotideihin ja mononukleotideihin, joissa on 3'-OH- ja 5'-monofosfaattipäät, se ei voi hajottaa yksi- tai kaksijuosteista DNA:ta tai RNA:ta.

RNaasi

Toiminta ja käyttö

Ribonukleaasi voi katalysoida ribonukleiinihapon (RNA) hajoamista ja se voidaan syntetisoida keinotekoisesti.Lääkevoidetta käytetään paikallisesti traumojen ja nivelkipujen hoitoon.Raporttien mukaan ribonukleaasi voi muuttaa isäntäsolun aineenvaihduntaa, estää virussynteesiä, estää influenssaviruksen proliferaatiota in vitro ja estää vaccinia- ja herpesviruksen muodostumista kanan alkioissa.Kliininen käyttö ribonukleaasin päivittäinen lihaksensisäinen injektio 180 mg, hyödyllinen hoitoon epidemia enkefaliitti, ribonukleaasi voi katalysoida hajoamista ribonukleiinihapon (RNA), ja voidaan nyt keinotekoisesti syntetisoida.Lääkevoidetta käytetään paikallisesti traumojen ja nivelkipujen hoitoon.Raporttien mukaan ribonukleaasi voi muuttaa isäntäsolun aineenvaihduntaa, estää virussynteesiä, estää influenssaviruksen proliferaatiota in vitro ja estää vaccinia- ja herpesviruksen muodostumista kanan alkioissa.Lihaksensisäisen 180 mg:n päivittäisen ribonukleaasiinjektion kliininen käyttö on hyödyllistä epidemian enkefaliitin hoidossa.

RNaasi

Inhibiittorin määritelmä

RNaasi-inhibiittoriyksikön määritelmä: Entsyymimäärä, joka tarvitaan estämään 50 % 5ng:n RNaasi A:n aktiivisuudesta, on yksi yksikkö.

Kuinka RNaasi-inhibiittorit toimivat

Guanidiini-isotiosyanaatti:

Guanidiini-isotiosyanaatti on orgaaninen yhdiste, jonka molekyylikaava on C2H6N4S.Käytetään pääasiassa biologisessa lääketieteessä, kemiallisissa reagensseissa jne. Guanidiini-isotiosyanaatti on proteiineja hajottava aine, ja sitä käytetään usein lyysiliuoksen pääkomponenttina molekyylidiagnostisissa reagensseissa.Se voi hajottaa kudosta, tuhota solurakenteen ja erottaa nukleiinihapon nukleoproteiinista, ja se denaturoituu voimakkaasti RNaasiksi.Se on tällä hetkellä tehokkain RNaasi-inhibiittori.

TRIzol on uusi kokonais-RNA:n uuttoreagenssi, joka voi suoraan uuttaa kokonais-RNA:ta soluista tai kudoksista.Se sisältää aineita, kuten fenolia ja guanidiini-isotiosyanaattia, jotka voivat nopeasti hajottaa soluja ja estää solujen vapauttamia nukleaaseja.

(Guanidiini-isotiosyanaatti on kuitenkin vaarallinen laboratoriotutkijoiden terveydelle.)

RNasiini:

Rotan maksasta tai ihmisen blastodermista uutettu hapan glykoproteiini.Rnasiini on ei-kilpaileva RNaasi-inhibiittori, joka voi sitoutua erilaisiin RNaasiin inaktivoidakseen niitä.

(Lisätietoja: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hkorkea lämpötila:

Korkea lämpötila on myös yleinen proteiinien denaturaatiokeino.

Dietyylipyrokarbonaatti (DEPC):

DEPC on vahva mutta epätäydellinen RNaasi-inhibiittori, joka voi inhiboida RNaasi-aktiivisuutta yhdistymällä RNaasi-aktiivisen ryhmän aminohappo-imidatsolirenkaaseen denaturoimaan proteiineja.

Vanadyyliribonukleosidikompleksi:

Vanadiinioksidi-ionien ja nukleosidien muodostama kompleksi, joka sitoutuu RNaasiin siirtymäaineina, mikä voi melkein kokonaan estää RNaasin toiminnan

muu:

SDS:llä, urealla, piimaalla jne. on myös tietty estävä vaikutus RNaasiin.

Asiantuntijaarvostelut

Li Yujie pääteknikko

Laboratorioosaston johtaja, Jiaozhou Hospital, Dongfang Hospital, joka on sidoksissa Tongjin yliopistoon

Eksogeenisen RNaasin biohajoamisen estämiseksi maskeja, käsineitä ja hattuja tulee käyttää ja vaihtaa usein RNA:n uuttoprosessin aikana.Kaikki lasiesineet tulee paistaa kuivausuunissa 200°C:ssa yli 2 tuntia.Leivonnassa käytettävät materiaalit, kuten muovi, on käsiteltävä DEPC-vedellä ja pestävä sitten tislatulla vedellä.RNA:n uuttamiseen, säilöntään ja tunnistamiseen käytettävät reagenssit tai laitteet on omistettava RNA:lle, ja RNA:n toiminta-alue on perustettava itsenäinen.

viittaukset:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et ai.Bakteerit ja virukset nenänielassa juuri ennen akuutin alahengitystieinfektion puhkeamista alkuperäiskansojen australialaisilla lapsilla [J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis, 2018, 37 (9): 1785-1794.

[2] Kiinan ennaltaehkäisevän lääketieteen yhdistyksen sairaala-infektioiden valvontaosasto.Ohjeet kliinisten mikrobinäytteiden keräämiseksi ja tarkastamiseksi [J].Chinese Journal of Hospital Infection, 2018(20):3192-3200.

[3] "Clinical Test Ten Thousand Why Molecular Biology Test Volume"