Esittely:

RNA, tieteellinen nimi ribonukleiinihappo, sen lyhenne tulee sanoista RiboNucleic Acid, on eräänlainen nukleiinihappo, joka muodostuu yhdistämällä vähintään kymmeniä ribonukleotideja fosfodiesterisidosten kautta.

RNA:n tutkimisen lähtökohtana on saada saasteeton kokonais-RNA, ja RNA:n erottamisen perusperiaate voidaan tiivistää karkeasti seuraavasti:

1. Hävitä solut ensin

2. Poista sitten makromolekyyliset epäpuhtaudet (proteiinit, lipidit, DNA jne.)

3. Lopuksi RNA saostetaan poistaen samalla suolat ja orgaaniset liuottimet ja edelleen puhdistamalla RNA

Uuttomenetelmän menneisyys ja nykyisyys

Ensimmäisen sukupolven RNA-uuttomenetelmä on Piotr Chomczynskin ja mummon Nicoletta Sacchin keksimä TRIzol-saostusmenetelmä (reagensseja ovat guanidiini-isotiosyanaatti, fenoli, kloroformi jne.), koska tämä keksintö mahdollistaa RNA:n erottamisen Nopeasti ja helposti, siitä lähtien alkoi RNA-tutkimuksen nousu.

Myöhemmin isoisä myi tämän patentin Invitrogenille, ja Invitrogen levitti tätä menetelmää maailmalle ja siitä tuli laajalti käytetty menetelmä.

Myöhemmin Thermo osti Invitrogenin!

Edustava tuote: Invitrogenin TRIzol-reagenssi

TRIzol-saostusmenetelmä vaatii kuitenkin useita saostuksia ja RNA:n uuttamista, ja käytetyt reagenssit ovat myrkyllisiä ja kestää kauan toimia.

Siksi syntyi toisen sukupolven pylväsentsyymipuhdistusmenetelmä, jossa käytettiin silikageelikalvoa spesifisenä nukleiinihappoadsorptiomateriaalina RNA:n talteenoton maksimoimiseksi näytteestä samalla kun muut epäpuhtaudet poistettiin.

Toisen sukupolven menetelmä yksinkertaistaa toimintaa vakaan suorituskyvyn perusteella, vähentää riskitekijää ja parantaa RNA:n erottamisen tehokkuutta.

Edustavia tuotteita: QIAGEN RNeasy ja useimmat kotimaiset tuotteet

Sekä ensimmäisen että toisen sukupolven menetelmät edellyttävät kuitenkin DNaasin käyttöä DNA-kontaminaation poistamiseksi, mikä tuo jonkin verran haittaa myöhemmille alavirran kokeille.Jäännös-DNaasi vähentää käänteistranskription tehokkuutta ja vähentää ensimmäisen juosteen cDNA-synteesiä, mikä vaikuttaa tulosten tarkkuuteen.

Siksi kolmannen sukupolven uuttomenetelmä optimoidaan toisen sukupolven perusteella.Kokeeseen ei tarvitse lisätä entsyymejä, ja RNA voidaan saada helposti vain kahdella kolonnilla.

Sarake 1: DNA-puhdistuspylväs DNA:n puhdistamiseksi

Sarake 2: Vain RNA Pylväs adsorboi ja ottaa talteen RNA:n spesifisesti

Tällainen yksinkertainen toimenpide ei vain säästä aikaa, vaan myös helpottaa loppupään kokeiden toimintaa!

Edustavia tuotteita: QIAGEN RNeasy Plus jaForegeneRNA puhdistus sarjan tuotteet

(RNeasy Plus)

（ForegenenPlant Total RNA Isolation Kit)

Kerro hiljaa!Foregenen RNA-pakkauksessa on myös erittäin helppokäyttöinen RNase Eraser, joka voi poistaa kokonaan 400 μg RNaasi kiinteältä pinnalta minuutissa ilman, että se lisää ihmiskehoon myrkyllisiä aineita!

Kuva1: Toimintaprosessien vertailukaavio

Foregenen tuotteet voivat suorittaa RNA:n erottamisen kahdessa kappaleessa, älä tee muita kateellisiksi kokeilusi edistymisestä!

Kuva2:Ekokeelliset tulokset vertailukaavio

Ensimmäinen sukupolvi (1: TRIzol)

Toinen sukupolvi (2: QIAGENin RNeasy)

Kolmas sukupolvi (3: QIAGENin RNeasy plus, 4: Foregene)

Kuva3: qPCR-kaavio (amplifikaatiokäyräkuvaaja)

Ensimmäinen sukupolvi (vihreä tarkoittaa TRIzol -, punainen tarkoittaa TRIzol +)

Toinen sukupolvi (taivaansininen tarkoittaa QIAGEN RNeasy-, punainen tarkoittaa QIAGEN RNeasy +)

Kolmas sukupolvi (sininen tarkoittaa QIAGEN RNeasy plus, vihreä tarkoittaa Foregene)

(Huomaa: qPCR-kaavio "-" tarkoittaa, että DNaasi ei ole lisätty eikä DNA-kontaminaatiota ole poistettu. Siksi CT on korkeampi ja tulos ei ole tarkka; "+" tarkoittaa, että DNaasi on lisätty ja DNA-kontaminaatio on poistettu, tulos on tarkka)

Jokainen tekninen päivitys tarkoittaa, että kokeilun toiminta kehittyy yksinkertaisempaan ja käyttäjäystävällisempään suuntaan.

Foregenen tavoitteena on auttaa useampia tieteellisiä tutkijoita säästämään kokeellista aikaa ja kustannuksia, saamaan korkealaatuisia koetuloksia ja yhdessä luomaan arvokkaampia tieteellisiä tutkimussaavutuksia.