Vinkkejä liiman palautumisen parantamiseen

1. Lisää näytekuormaa elektroforeesin aikana.

2. Käytä juuri valmistettua elektroforeesipuskuria.

3. Kun leikkaat liimaa, yritä leikata vain liimaa nauhoilla liimaleikkauksen määrän vähentämiseksi: älä tarvitse liimaa, jossa on vähän käyttötarkoituksia, muuten se vaikuttaa palautumisnopeuteen.

4. Kun olet sulattanut kaksi tai useampaa liimapalaa, käytä putkea tilavuudesta riippumatta ja siirrä se samaan kolonniin.

5. Sooliin lisättyä liuosta voi olla hieman enemmän, mikä edistää DNA:n sitoutumista kalvoon, mutta ei yleensä ylitä 750 ul.

6. Avain geelin talteenottoon on DNA:n sitominen kolonniin kolonnissa olevan liuoksen suolapitoisuuden, happamuuden (varauksen) ja hydrofobisuuden kautta.Siksi, jos elektroforeesipuskurin pH on liian korkea, sooliin voidaan lisätä 10 ul (pH 5,0, 3 mol/l NaAC);DNA-molekyylien paremmin sieppaamiseksi kalvolla voidaan lisätä 30 % isopropanolia lämmittäväksi nesteeseen liiman liukenemisen jälkeen.

7. Ennen kuin lisäät eluentin, jätä kolonni huoneenlämpötilaan muutamaksi minuutiksi (noin 10 minuutiksi), jotta etanoli haihtuu kokonaan.

8. Lisää lopuksi vähemmän eluenttia talteenottotilavuuden minimoimiseksi.Yleensä eluointiin käytetään 30-50 μl eluenttia (ei liian vähän, muuten se ei pysty kastelemaan kalvoa, mikä ei edistä eluointia);eluointipisarat ovat kalvon keskellä eluoiden täysin kalvoon sitoutuneen DNA:n.

9. Eluentin lisäyksen jälkeen se voidaan eluoida 55-asteisessa vesihauteessa 5 minuuttia tai laittaa 50-asteiseen vesihauteeseen yli 10 minuutiksi tai sulkea parafilmillä 4 asteessa yön yli ja sitten sentrifugoida talteenottoa varten seuraavana päivänä, vaikutus on hyvä.

10. Lisää sentrifugoitu eluaatti takaisin adsorptiokolonniin ja sentrifugoi uudelleen.

Yksityiskohtaiset menetelmät ja menettelyt PCR-tuotteen talteenottamiseksi

1. Tavallinen kumin kierrätys

Jos haluat ottaa talteen liiman, on parasta käyttää sarjaa, joka on kätevä ja jolla on hieman korkeampi talteenottoaste.Jos sinun on todella palautettava se manuaalisesti, voit lisätä 3-kertaisen TE:n tilavuuden liiman leikkaamisen jälkeen.Vesihauteessa sulatuksen jälkeen fenoli, fenoli/kloroformi uutetaan puhtaasti ja etanoli saostetaan.Se siitä.

2. DNA:n talteenotto matalan sulamispisteen geeleistä

DNA-fragmenttien puhdistaminen Lisää TE:tä (10 mmol/l Tris-HCl pH 8,0, 0,1 mmol/l EDTA) yhtä paljon kuin geelin tilavuus ja aseta 65 °C:seen vesihauteeseen 5 minuutiksi geelin liuottamiseksi täydellisesti.

Kun se oli saatettu huoneenlämpötilaan, lisättiin yhtä suuri määrä fenolia (kyllästetty TE:llä, TE suljettiin ylempään kerrokseen ja alempi fenolikerros poistettiin), ja seosta sekoitettiin varovasti (sekoitusta ei vaadittu) ja sentrifugoitiin nopeudella 12 000 rpm 3 minuuttia.Toista 1-2 kertaa.

Ota supernatantti, lisää 0,1 tilavuus 3 mol/l natriumasetaattia (pH 5,2) ja 2,5-kertainen tilavuus absoluuttista etanolia suorittaaksesi etanolisaostuksen.Liuota puhdistettu DNA sopivaan määrään TE:tä, mittaa sisältö ja valmistele käyttöä varten (sitä voidaan käyttää kohdegeenin rakenneanalyysiin, koettimen valmistukseen jne.).

3. PCR-talteenotto hyvällä monistusspesifisyydellä

Jos PCR-monistuksen spesifisyys on hyvä, se on vain PCR-tuotteen yksinkertainen puhdistus ja talteenotto.Voit lisätä PCR-tuotteeseen 50 ug/ml proteinaasi K:tä, 37 astetta 1 tunnin ajan, uuttaa kerran fenoli/kloroformilla, uuttaa kerran kloroformilla ja lisätä 0,1 tilavuusosa supernatanttia.Natriumasetaatti otettiin talteen saostamalla 2,5 tilavuudella absoluuttista etanolia.

Liittyvät tuotteet:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/