Seuraava analyysi mahdollisista ongelmistaBukkaalinenmoppi/Vapaakauppasopimus card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Puhdistuskolonni on tukossa

Tässä pakkauksessa genomisen DNA:n uuttooperaatiossa puhdistuspylväs adsorboidaan suoraan näytteen entsymaattiseen lyysiseokseen ilman sentrifugointivaihetta, ja puhdistuspylväs voi olla tukkeutunut epätäydellisen entsymoinnin ja näytteen korkean viskositeetin vuoksi.

Seuraavat mahdolliset syyt ovat seuraavat:

1. Kudosnäytteiden epätäydellinen entsymaattinen pilkkominen.

Suositus: Foregene Protease -näytteen käsittelyaikaa voidaan pidentää sopivasti tai supernatantti voidaan ottaa sentrifugoinnin jälkeen 12 000 rpm (~13 400)× g) 5 minuutin ajan.

2. Kudosnäytteiden tai suurten kudosten liiallinen käyttö.

Suositus: On parasta olla yli 1Bukkaalinen vanupuikko näytteessä;jos näyte on liian suuri, lisää puskurin ST1, Foregene Protease ja puskurin ST2 annosta vastaavasti.

3. Näytteen viskositeetti on liian korkea.

Suositus: Näytteet voidaan asianmukaisesti laimentaa 10 mM Tris-HCl:lla ennen genomisen DNA:n uuttamista.

4. Verikortin palaset on imetty.

Suositus: Veripisteen (FTA Card) genomiuuton vaiheen 6 ohimenevää sentrifugointiaikaa voidaan pidentää sopivasti.

Alhainen saanto tai ei DNA:ta

Usein on monia tekijöitä, jotka vaikuttavat genomisen DNA:n saantoon, mukaan lukien näytteen alkuperä, näytteen säilytysolosuhteet, näytteen valmistus, käsittely jne.

Genomista DNA:ta ei voida saada uuttamisen aikana

Mahdolliset syyt ovat seuraavat:

1. Näytteiden väärä säilytys tai liian pitkä varastointi johtaa genomisen DNA:n hajoamiseen.

Suositus: Pyyhkäisynäytteistä tulee mieluiten ottaa tuoreita näytteitä, eikä ole suositeltavaa käyttää säilöttyjä vanupuikkoja genomisen DNA:n erotusoperaatioissa.veripistenäytteiden tulee varmistaa, että laatu on laadukasta, eikä varastointiaika saa olla liian pitkä.

2. Liian vähäinen kudoksen käyttö saattaa johtaa siihen, että vastaava genominen DNA ei poistu.

Suositus: Noudatabuccal vanupuikkonäytteenotto-ohjeet käyttöoppaasta ja pyyhi mahdollisimman monta kertaa, jotta tarpeeksi soluja voidaan kiinnittää vanupuikkoon genomisen DNA:n uuttamista varten;veripistenäytteen ottoa varten veripisteen leikkausaluetta voidaan lisätä sopivasti.

3. Foregene Protease on säilynyt väärin, mikä johtaa sen aktiivisuuden vähenemiseen tai inaktivoitumiseen.

Suositus: Vahvista säilytysolosuhteetForegene Protease tai korvaa se uudella Foregene Proteaasilla entsymaattista reaktiota varten.

4. Sarjan väärä säilytys tai säilytysaika on liian pitkä, mikä johtaa joidenkin sarjan osien vikaantumiseen.

Suositus: Osta uusiBukkaalinen vanupuikko DNAeristäytyminen sarja asiaan liittyville toimenpiteille.

5. Puskuri WB ei lisää absoluuttista etanolia.

Suositus: Varmista, että puskuri WB lisää oikean määrän absoluuttista etanolia.

6. Eluenttia ei ole lisätty oikein silikonikalvoon.

Suositus: Lisää 65°Cesilämmitetty eluentti putoaa silikonikalvon keskelle ja jätetään huoneenlämpötilaan 5 minuutiksi eluointitehokkuuden lisäämiseksi.

Low-yelding genominen DNA eristetty

Seuraavat mahdolliset syyt ovat seuraavat:

1. Näytteiden väärä säilytys tai liian pitkä varastointi johtaa genomisen DNA:n hajoamiseen.

Suositus: Vanupuikkonäytteet otetaan mieluiten vasta, eikä säilöttyjä vanupuikkoja tule käyttää genomisen DNA:n erottamiseen.

2. Jos kudosnäytteen määrä on liian pieni, erotetun genomisen DNA:n pitoisuus on pienempi.

Suositus: Noudata käyttöohjeessa olevia vanupuikkonäytteenottoohjeita ja pyyhi niin monta kertaa kuin mahdollista, jotta vanupuikkoon voidaan kiinnittää riittävästi soluja genomisen DNA:n erottamista varten.

3. Foregene Protease on säilynyt väärin, mikä johtaa sen aktiivisuuden vähenemiseen tai inaktivoitumiseen.

Suositus: Vahvista säilytysolosuhteetthe Foregen Protease tai korvaa se uudella Foregene Protease entsymaattiseen reaktioon.

4. Eluenttiongelmat.

Suositus: Käytä eluointiin Buffer EB:tä;jos käytät ddH:ta₂O tai muut eluentit varmista, että eluaatin pH on välillä 7,0-8,5.

5. Eluaattia ei ole lisätty oikein tipoittain.

Suositus: Lisää eluenttipisaroita silikonikalvon keskelle ja anna olla huoneenlämmössä 5 minuuttia eluointitehokkuuden lisäämiseksi.

6. Eluutionestettä kerääntyy liian vähän.

Suositus: Käytä genomisen DNA:n eluointiin vähintään ohjeen mukaista eluenttiaei vähempää kuin 15μl.

Loi puhtaus of genominen DNAeristetty

Alhainen genomisen DNA:n puhtaus voi johtaa alavirran kokeiden epäonnistumiseen tai epätyydyttäviin tuloksiin, kuten: entsyymejä ei voida leikata auki, PCR ei saa kiinnostavaa geenifragmenttia jne.

Mahdolliset syyt ovat seuraavat:

1. Heteroproteiinisaaste, RNA-saaste.

Analyysi: Puhdistuskolonnia ei pesty käyttämällä puskuria PW;puskurin PW-pesupuhdistuskolonnia ei pesty käyttämällä oikeaa keskipakonopeutta.

Suositus: Varmista, että supernatantissa ei ole saostumista ennen etanolin lisäämistä;muista pestä puhdistuskolonni ohjeiden mukaisesti, eikä tätä vaihetta voi jättää väliin.

2. Epäpuhtausionien saastuminen.

Analyysi: Puskurin WB pesupuhdistuspylväs jätettiin pois tai pestiin vain kerran, mikä johti jäännösioniseen kontaminaatioon.

Suositus: Muista pestä Buffer WB 2 kertaa ohjeiden mukaisesti poistaaksesi jäännösionit mahdollisimman paljon.

3. RNA-entsyymikontaminaatio.

Analyysi: Vieraita RNaaseja lisättiin puskuriin;Puskurin PW-pesutoiminta oli virheellinen, mikä johti RNaasi-tähteisiin, jotka vaikuttivat alavirran RNA:n kokeellisiin toimintoihin, kuten in vitro -transkriptioon.

Suositus: Foregene-sarjan nukleiinihappoisola-sarjat voivat poistaa RNA:ta ilman ylimääräistä RNaasin lisäämistä,täten bukkaalipuikko/FTA-kortti DNA-eristyssarjaNeedn't lisää RNaasi;muista noudattaa Buffer PW -pesupuhdistuskolonnin ohjeita, eikä tätä vaihetta voi jättää väliin.

4. Etanolijäännös.

Analyysi: Puskuri WB ei suorittanut tyhjän putken sentrifugointia puhdistuskolonnin pesun jälkeen.

Suositus: Suorita oikea tyhjän putken sentrifugointi ohjeiden mukaisesti.

5. Muut epäpuhtaudet.

Analyysi: Tallennettuja näytteitä tai erikoisnäytteitä ei esikäsitetä.

Suositus: Esikäsittele näyte perusteellisesti ohjeiden mukaisesti.